Aplicación de partículas pseudovirales al estudio de la infección productiva por HPV

GARDIOL, D ; BUGNON VALDANO, M; BANKS, L; MASSIMI, P

Jornada; JORNADA CIENTIFICA DEL INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO; 2020

Las infecciones por los virus del papiloma humano (HPV) se asocian a diversas patologías, entre las que sedestaca el cáncer cérvico uterino en mujeres, con especial relevancia en países en desarrollo. Por ello, elestudio del ciclo de vida de estos virus y de los mecanismos que llevan al establecimiento de la infecciónson de gran importancia.En este sentido, la tecnología de producción de partículas recombinantes sintéticas de HPV como laspartículas pseudovirales (PsV) han facilitado en gran medida el estudio de los mecanismos asociados a lainfectividad, la transmisión, la inmunogenicidad y la estructura viral. Dichas PsV se constituyen por unacápside, formada por ambas proteínas estructurales virales (L1 y L2), envolviendo a un pseudogenoma conun gen reportero. Haciendo uso de dicha herramienta, en este trabajo reportamos la incumbencia de unnuevo factor celular en la infección de HPV: el complejo de chaperoninas CCT.Dicho complejo CCT, interactúa con gran cantidad de blancos celulares, ayudando a su plegamientogeneralmente en el citosol. Ensayos proteómicos con células HEK293 expresando L2 de HPV condujeron ala identificación de proteínas CCT como nuevos partners de interacción. En consecuencia, en este estudioanalizamos la interacción de las proteínas estructurales del HPV con diferentes componentes del complejoCCT y la relevancia de esta interacción durante la infección. Así, mostramos que la subunidad 3 de CCT(CCT3) se une a L2, y mapeamos esta interacción con la región N-terminal de la proteína viral.Más aún, a partir de la implementación de la tecnología de PsV, se observó que la pérdida de CCT3 encélulas en cultivo causa una reducción en los niveles de infección por HPV. Llamativamente, se observóuna co-localización de las partículas pseudovirales con distintas subunidades del complejo y entre ellasCCT3. Esta co-localización tuvo lugar a tiempos tempranos post-infección y en estructuras positivas parael marcador de endosomas tardíos Rab7. También, se demostró que CCT3 sería importante en el normalprocesamiento viral durante la infección. En conclusión, estos resultados indican que el complejo CCTjuega un papel importante durante la infección del HPV.Asimismo, implementaremos la tecnología de producción de PsV en nuestro laboratorio, lo que constituyeuna innovación a nivel local, y nos permitirá evaluar la relevancia en la entrada viral infectiva de otrasproteínas celulares y en particular de proteínas de polaridad, siendo las misma de especial interés para elgrupo. Además, cabe destacar el potencial biotecnológico de las mencionadas partículas recombinantes y,específicamente, su aplicación en equipos de diagnóstico serológico, lo que forma parte de nuestrosobjetivos futuros.