ESTUDIO DEL ROL DE LA PROTEÍNA HMGB DE Trypanosoma cruzi FRENTE AL DAÑO Y REPARACIÓN DEL ADN

SENSOLINI LOANNA; SERRA ESTEBAN; CRIBB PAMELA

Rosario

Congreso; XXI Congreso y XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario 2019; 2019

Sociedad de Biología de Rosario

Trypanosoma cruzi es el agente causal de la enfermedad de Chagas, endémica en América Latina. Este protozoo presenta características únicas en cuanto a la organización y expresión de sus genes. Los genes codificantes para proteínas están organizados en tándems. Cada tandem o ?cluster? de genes es transcripto como un policistrón que luego es procesado mediante una reacción de trans-splicing. Por otra parte, los tripanosomas no condensan sus cromosomas durante la división mitótica y si bien presentan ortólogas de las histonas canónicas, éstas son altamente divergentes. Las proteínas High Mobility Group B (HMGB) son las proteínas no histonas más abundantes de la cromatina, y por su capacidad de modificar la estructura del ADN, participan y afectan procesos esenciales para la célula como el control transcripcional, la replicación, la recombinación y la reparación del ADN. La HMGB de T. cruzi (TcHMGB) fue caracterizada por primera vez en nuestro grupo, y al igual que otros miembros de la familia, es capaz de reconocer y unirse preferentemente a estructuras distorsionadas del ADN y de provocar una curvatura de la doble hélice. Estas propiedades ?arquitectónicas? de TcHMGB resultan en una distorsión tanto de la estructura de la cromatina como de toda la estructura nuclear al ser sobreexpresada en el parásito. La sobreexpresión de TcHMGB en epimastigotes, provocó una acumulación de parásitos en fase G2/M del ciclo celular. Una posible explicación a este arresto, es que el aumento en los niveles de TcHMGB resulte en una cromatina más relajada y por lo tanto más sensible al daño del ADN. Así, la acumulación de mutaciones podría inducir una falla en alguno de los ?check points? del ciclo. Por lo tanto, decidimos evaluar la sensibilidad frente al daño producido por la radiación UV en relación a los niveles de TcHMGB. Para esto, utilizamos parásitos transfectantes obtenidos en nuestro laboratorio, los cuales inducen un aumento de unas 10 veces en los niveles de TcHMGB luego del agregado de Tetraciclina. Por otra parte, se intentó construir una cepa ?Knock out? (K.O.) para TcHMGB mediante el sistema CRISPR/Cas9, sin éxito hasta en momento, lo cual sugiere que sería un gen esencial. La utilización del sistema de expresión inducible por tetraciclina, nos permitió evaluar el efecto en distintos momentos: induciendo la expresión de TcHMGB antes del tratamiento con UV, podemos ver si la cromatina enriquecida en TcHMGB es más sensible al daño, mientras que la sobreexpresión por agregado de tetraciclina posterior al tratamiento con UV, podría indicarnos si los mayores niveles de proteína pueden facilitar la reparación del ADN. Nuestros resultados sugieren que la cromatina más relajada debido al exceso de TcHMGB es más sensible al UV, ya que los parásitos sobreexpresantes sometidos al tratamiento con UV presentaron un menor crecimiento. Un efecto similar se observó al inducir luego del tratamiento, lo cual sugiere que los mayores niveles de TcHMGB no facilitan el acceso a la maquinaria de reparación, sino que de alguna manera, la dificultan. Así, la imposibilidad de obtener los parásitos K.O. y los efectos deletéreos observados al sobreexpresar TcHMGB, sugieren que los niveles de esta proteína deben estar finamente regulados para el normal desarrollo de estos parásitos, lo que la convierte en un posible blanco para el desarrollo de compuestos tripanocidas.