CARACTERIZACIÓN DE LA ALPHA-TUBULINA ACETILTRANSFERASA DE Trypanosoma cruzi (TcATAT)

MARTINEZ PERALTA G; ALONSO VL; SERRA EC; CARLONI ME

Rosario

Congreso; XXI Congreso de la Sociedad de Biologia de Rosario; 2019

Sociedad de Biologia de Rosario

La Enfermedad de Chagas (o Tripanosomiasis Americana) es una de las 17 enfermedades tropicales desatendidas listadas por la Organización Mundial de la Salud (OMS); es endémica en 21 países de América Latina y produce un número mayor de muertes que cualquier otra enfermedad parasitaria, incluso que la malaria. La acetilación de proteínas se ha revelado en los últimos años como una de las modificaciones postranscripcionales más frecuentes, tanto en bacterias como el células eucariotas. Si bien las bases moleculares de su acción no son completamente conocidas, se ha establecido que modula importantes procesos celulares como la modificación de la estructura de la cromatina, la transcripción, la progresión del ciclo celular, la regulación del metabolismo energético y la remodelación de microtubulos. Los microtúbulos son estructuras celulares esenciales construidas a partir de tubulina que son prometedores blancos de fármacos antimicrobianos. La disposición del citoesqueleto de T. cruzi es más simple que la de otras células eucariotas, pero está organizada con precisión y está constituida por microtúbulos estables. Tales microtúbulos componen el huso mitótico, el cuerpo basal, los microtúbulos flagelares y subpelliculares, que están conectados entre sí y con la membrana plasmática formando una disposición helicoidal a lo largo del cuerpo celular del parásito. La acetilación de α-tubulina se encuenta conservada desde eucariotas inferiores a mamíferos y se asocia con la estabilidad de los microtúbulos. También se sabe que la acetilación ocurre significativamente en flagelos, centríolos, cilios, en el cuerpo basal y huso mitótico. La principal acetiltransferasa encargada de acetilar α-tubulina se identificó recientemente como Mec-17/ATAT, una N-acetyltransferasa relacionada con Gcn5. A pesar de la evidencia que respalda el papel de la acetilación en la estabilidad de los microtúbulos, su función biológica in vivo no está clara. Hemos expresado ATAT de T. cruzi con una etiqueta de HA en en estadio de epimastigotes (estadio replicativo en el insecto vector) usando el vector inducible pTcINDEX-GW. Los parásitos sobreexpresantes presentan un defecto en el crecimiento y también observamos una disminución de su infectividad y una alteración en la diferenciación de amastigotes (estadio replicativo intracelular) a tripomastigotes (estadio infectivo). TcATAT se localiza en el citoesqueleto y flagelo de T. cruzi según lo determinado por western blot y microscopía confocal. Además, TcATAT colocaliza con la α-tubulina acetilada en estas estructuras y su sobreexpresión provoca un aumento de los niveles de la isoforma acetilada. Además, la sobreexpresión provoca la detención en la progresión del ciclo celular de epimastigotes determinado por citometría de flujo y SEM. Finalmente, cuando ATAT se sobreexpresa observamos que los parásitos se vuelven más resistentes a fármacos despolimerizantes de microtúbulos. Estos resultados apoyan la idea de que TcATAT es responsable de acetilar la α-tubulina y además es crucial para la replicación y diferenciación de T. cruzi siendo un nuevo interesante blanco contra la enfermedad de Chagas.