Glicosilación de la flagelina en R. solanacearum y su implicancia en los procesos de virulencia

LANDONI MALENA; TONDO MARIA LAURA; COUTO S. ALICIA; VANDECAVEYE AGUSTINA; ORELLANO G. ELENA

Rosario, Santa Fe, Argentina

Jornada; XIII Jornada de Ciencia y Tecnología. Divulgación de la Producción Científica y Tecnológica de la UNR; 2019

La adición de carbohidratos a la flagelina, subunidad estructural del flagelo bacteriano, ha sido reportada en un gran número de bacterias Gram-negativas, siendo en la mayoría de los casos requerida para el ensamblado, estabilidad y funcionalidad del filamento flagelar. En el caso particular de bacterias patógenas, se ha demostrado que juegan un rol esencial en la virulencia y en la evasión de la respuesta inmune del hospedador. La marchitez bacteriana causada por Ralstonia solanacearum (Rso) es una enfermedad que afecta a numerosos cultivos de importancia económica. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la glicosilación de la proteína flagelina de Rso e iniciar el estudio de la funcionalidad de los genes RSp0387 y RSp0388, los cuales se encuentran localizados entre los genes flagelares y codifican para putativas glicosiltransferasas. Para ello se realizaron aislamientos de flagelina a partir de cultivos de la cepa salvaje de Rso GMI1000; los extractos proteicos obtenidos se analizaron mediante SDS-PAGE y se identificó la banda correspondiente a la proteína bajo estudio mediante análisis por HPLC-ESI. La glicosilación de la flagelina se corroboró mediante tinción con PAS y posteriormente se caracterizó el patrón de glicosilación mediante espectrometría de masas (MS) y HPAEC-PAD, determinando la presencia de N- y O-glicanos de entre 3 y 14 unidades de hexosa. Por otra parte, con el objetivo de evaluar la función de los genes Rsp0387 y Rsp0388, se generaron mutantes de Rso por deleción de los mismos y se caracterizaron fisiológicamente. Las cepas mutantes exhibieron estructuras flagelares normales bajo microscopía TEM pero reducidos halos de motilidad en placas de swimming, lo que sugiere que la función del flagelo estaría afectada por la ausencia de dichos genes. Además, se encontraron diferencias significativas en ensayos de autoaglutinación de dichas cepas en comparación con la cepa parental salvaje. Asimismo se realizaron ensayos de infección en plantas hospedadoras de tomate (Solanum lycopersicum) en los cuales se observaron diferencias en las curvas de progreso de la enfermedad para las distintas cepas ensayadas; las plantas infectadas con las cepas mutantes evidenciaron síntomas de marchitez con más rapidez que las plantas inoculadas con la cepa salvaje, evidenciando las plantas infectadas con las cepas mutantes síntomas de marchitez con mayor rapidez que aquellas inoculadas con la cepa salvaje.