Identificación y Caracterización de las Superóxido Dismutasas en Aislamientos Altoandinos del Género Acinetobacter

SARTORIO M; CORTEZ N; STEIMBRUCH B; DI CAPUA C; REPIZO GD

Congreso; SAMIGE; 2019

Introducción y Objetivos: Las Lagunas de Altura de la Puna Andina (LAPA ́s) se encuentran en el noroestede Argentina y se caracterizan por estar expuestas a una alta intensidad de radiación UV, amplias fluctuacionestérmicas y por presencia de metales pesados como arsénico. Acinetobacter sp. Ver3 es un poliextremófiloaislado de las LAPA ́s que presenta resistencia a la radiación UV y a pro-oxidantes como H2O2 y metilviológeno(MV).El análisis del genoma secuenciado de Ver3 reveló la existencia de dos genes codificantes para actividadsuperóxido dismutasa (SOD): una citosólica de tipo Fe/Mn (SodB) y otra de tipo Cu/Zn (SodC) que posee unpéptido señal de direccionamiento a periplasma.Materiales y Métodos: Los genes codificantes para SODs de tipo Fe/Mn (sodb) y CuZn (sodc) de A. ver3fueron amplificados por PCR y clonados en vectores de expresión de la serie pET para la posteriorcaracterización de las proteínas recombinantes. Para evaluar el contenido de metal de FeMnSOD, se realizaronmedidas por ICP-MS en LB y BM2 junto con ensayos de inhibición con H2O2 . Mediante el uso de anticuerpospoliclonales se evaluó la expresión de sodb en respuesta a diferentes condiciones de estrés. El gen sodc juntocon su región promotora fue amplificado por PCR y posteriormente clonado en el vector pMBLe. Para evaluar surespuesta frente a agentes prooxidanes mediante recuento de UFC, se utilizó como modelo de estudio cepas A.baylyi ADP1 transformadas con pMBLeSOD. Las mismas fueron crecidas en LB hasta alcanzar una DO de 0.6para luego ser tratadas con agentes prooxidantes como MV, H2O2 y Riboflavina + TEMED como agentegenerador de O2- en presencia de luz.Resultados: Si bien estudios filogenéticos ubican a SodB dentro del grupo de las SODs de tipo Fe, las medidasde contenido metálico en la proteína recombiante. por ICP-MS de indicaron que el contenido de Mn++ aumentaconsiderablemente si este se suplementa a BM2 con el metal, sugiriendo así que se trata de una SOD de tipocambialística. El gen sodC conteniendo 300 pb corriente arriba fue amplificado por PCR y clonado en el vectorpMBle replicativo para Acinetobacter, obteniéndose el plasmido pMSodC. Células de A. baylyi ADP1transformadas con pMSodC se hicieron crecer en LB y fueron tratadas con MV, H2O2 y Riboflavina + TEMED,siendo este último un agente generador de O2-; extracelular en presencia de luz. ADP1 transformada con pMSodC presento un mayor desarrollo con respecto a la cepa control frente al agregado de Riboflavina +TEMED indiacando la función de SodC en la defensa frente al superóxido extracelular.Conclusiones: Acinetobacter sp. Ver3 posee dos superóxido dismutasas (SODs). Una enzima es del tipo Fe/Mny posee carácter cambialístico, modificando su contenido metálico en función de la oferta del medio de cultivo.Funciona detoxificando el superóxido intracelular subproducto de la respiración aeróbica. La otra SOD es deltipo Cu.Zn y de localización periplásmica. Su función detoxificadora es manifiesta ante la presencia desuperóxido extracelular. La presencia de SodC en A. baylyi ADP1 otorga a la célula huésped una mayorvelocidad de crecimiento en aerobiosis.