Caracterización molecular de una cepa clínica de Acinetobacter junii productora de NDM-1: taxonomía y plataforma genética de resistencia

MARCHIARO PATRICIA; PEREZ JORGELINA; LIMANSKY ADRIANA S.; DIAZ SUSANA; VIALE ALEJANDRO M.; BROVEDAN, MARCO A.; LARINI S

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019

Especies de Acinetobacter spp han sido documentadas como portadoras del gen codificante de la metalo-β-lactamasa (MβL) NDM-1. La caracterización de plataformas genéticas que incluyen blaNDM-1 en diferentes especies de este género provee evidencias de la diseminación de dicho gen desde microorganismos ambientales a patógenos oportunistas. En este contexto, se evaluó el entorno genético y localización de blaNDM-1 en una cepa clínica de Acinetobacter sp recuperada de un hospital de Rosario. Se estudió 1 aislamiento de A. haemolyticus (según VITEK 2C, BioMerieux), o A. junii/A. johnsonii según espectrometría de masa (MALDI Biotyper, Bruker) recuperado de un paciente internado en un hospital público de Rosario en 2019, productor de MβL según ensayos de sinergia. El marcador taxonómico empleado fue rpoB, y la caracterización del gen de resistencia (R) involucró la amplificación de genes codificantes de blaIMP, blaVIM, y blaNDM. El análisis de la plataforma genética involucró ensayos de conjugación y transformación así como PCR/secuenciación para evaluar el entorno genético inmediato del gen R, y regiones específicas de plásmidos tipo-pNDM-BJ01. La amplificación/secuenciación de rpoB indicó 98,9 % de identidad con la cepa tipo A. junii ATCC 17908 por tanto se reasignó como A. junii. Los ensayos de transferencia de ADN empleando E. coli DH5α como aceptora resultaron negativos. Sin embargo, ensayos de conjugación empleando A. bereziniae HPC229 curada del plásmido tipo pNDM-BJ01 (HPC229c, 1) y A. baylyi ADP1 mostraron transconjugantes (Tc) resistentes ceftazidima. Ensayos posteriores de conjugación desde éstas a A. baylyi ADP1 resistente a tetraciclina mostraron el carácter autotransferible del plásmido con blaNDM-1. Dichas Tc mostraron ser productoras de NDM-1, según ensayos de sinergia y PCR; y resistentes a trimetoprima-sulfametoxazol (TMS) según ensayos de susceptibilidad. La caracterización molecular de las Tc mostró ISAba125/blaNDM-1 así como la ausencia de la región ISAba14/aphA6 corriente arriba, usual en plásmidos tipo-pNDM-BJ01. La R a TMS motivó amplificar regiones de integrones clase 1 en las Tc, lo que condujo a hallar este elemento en dicho plásmido. La falla en la amplificación de un fragmento conservado de la región de transferencia de plásmidos conjugativos tipo-pNDM-BJ01 asociados a Acinetobacter sp., así como la falla en la recuperación de Tc de E. coli evidencian que el plásmido es diferente a los pNDM-BJ01 usuales de Acinetobacter spp, los cuales replican además en E. coli. Finalmente, la cepa clínica A. junii constituye al presente la primera cepa de esta especie productora de NDM-1 de nuestra ciudad. Este trabajo muestra un entorno genético inmediato distinto para blaNDM-1 así como un plásmido que difiere de los reportados en Acinetobacter spp, agregando evidencia de plataformas genéticas diferentes en miembros de Acinetobacter no baumannii (1), considerados reservorios de blaNDM-1.1. Brovedan et al., AAC 2015.