Estudio comparativo del rol de la proteína TcHTE de Trypanosoma cruzi en el transporte de hemina y hemoglobina

CRICCO JULIA; PAGURA LUCAS; TEVERE EVELYN

Resistencia

Congreso; XXX Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2018

Sociedad Argentina de Protozoología

Trypanosoma cruzi es auxótrofo para hemo. Sin embargo, este cofactor es esencial para el parásito, ya que forma parte de diversas hemoproteínas y enzimas. En nuestro laboratorio estamos interesados en elucidar cómo el hemo es incorporado, distribuido y metabolizado para ser utilizado por el parásito. Dada la importancia de estos procesos, el transporte de hemo es considerado un blanco promisorio para la inhibición de la proliferación del parásito. En el laboratorio, identificamos y estudiamos una proteína de membrana de T. cruzi que denominamos TcHTE (T. cruzi Heme Transport Enhancer), cuya función es esencial para la incorporación de hemo desde el medio extracelular. TcHTE se localiza en el bolsillo flagelar, donde se postula que ocurre el transporte de metabolitos en tripanosomátidos y se expresa principalmente en los estadios replicativos del parásito (epimastigotes y amastigotes). Además, en epimastigotes, la expresión de TcHTE responde a la concentración intracelular de hemo, tanto a nivel de ARNm como de proteína. Dado que la hemoglobina es la principal fuente de hemo para el parásito, analizamos el crecimiento de epimastigotes y la expresión y localización de TcHTE en parásitos Wild Type y en levaduras que expresan TcHTE recombinante en función de la fuente de hemo, Hemina vs. hemoglobina (Hb), en cantidades equimolares de hemo.RESULTADOS: No se observaron diferencias significativas en el crecimiento de levaduras deficientes en la síntesis de hemo (hem1 que expresan rTcHTE utilizando hemina o Hb como suplemento. Sin embargo, el perfil de crecimiento de epimastigotes, su morfología y motilidad resultaron diferentes dependiendo de la fuente de hemo utilizada, donde la presencia de hemina efectó negativamente estas características en comparación con cantidades equivalentes de Hb. Esto muestra que la exposición a hemo libre causaría mayor toxicidad a los epimastigotes en cultivo axénico. El análisis por Western blot de TcHTE no mostró variaciones significativas en muestras provenientes de epimastigotes incubados con hemina o con Hb.CONCLUSIONES: La expresión de TcHTE en levaduras permite su crecimiento en medios restrictivos de hemo independientemente de la fuente de hemo utilizada (hemina o Hb). En epimastigotes, la utilización de hemina como fuente de hemo causa mayor efecto tóxico en cultivo axénico que la utilización de Hb. TcHTE responde de la misma manera a la importación de hemo en epimastigotes independientemente de la fuente de hemo utilizada (hemina o Hb).