IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la proteína de unión a ARN, Hfq, de Xanthomonas citri subsp. citri y su rol en la cancrosis de los cítricos
Autor/es:
TANO, JOSEFINA; MOYANO, LAURA; ORELLANO, ELENA G.; PETROCELLI, SILVANA; PEREZ FALCÓN, AYELÉN
Lugar:
Rosario
Reunión:
Jornada; XII Jornadas en Ciencia y Tecnología; 2018
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Rosario
Resumen:
En bacterias los ARNs pequeños (sARNs) han sido reconocidos como importantes reguladores de la expresión génica desempeñando roles esenciales en múltiples procesos celulares, incluyendo la respuesta al estrés biótico y abiótico. Los sARNs generalmente presentan un tamaño que oscila entre 50 y 500 nucleótidos. La gran mayoría actúan por apareamiento de bases con sus ARNs blanco, modulando la traducción y la estabilidad de los mARNs, aunque algunos actúan controlando la actividad de proteínas. La proteína Sm-like Hfq es un factor clave en los procesos de regulación mediados por ARN. La misma afecta la estabilidad de los sARNs y promueve la interacción sARN-mARN e influye en la velocidad de traducción y en el tiempo de vida media del transcripto blanco. La pérdida de la proteína Hfq tiene un gran impacto en la fisiología bacteriana y, en muchos patógenos animales, afecta la virulencia. Sin embargo, se han realizado pocos estudios acerca de los sARNs y la proteína Hfq en fitopatógenos bacterianos. Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) es el fitopatógeno responsable de la cancrosis de los cítricos tipo A, una de las enfermedades más severas de los cultivos de cítricos a nivel mundial. En este trabajo se planteó como objetivo estudiar el rol de la proteína Hfq de Xcc en la fisiología de la bacteria y su participación en la patogenicidad bacteriana durante la cancrosis de los cítricos en plantas de naranjo. Para ello se construyó una cepa mutante en el gen hfq (XccΔhfq) y la correspondiente cepa complementante (cXccΔhfq). Se realizaron ensayos de swimming y swarming en placas con medio mínimo XVM2-agar 0,3% p/v y XVM2-agar 0,7% p/v, respectivamente, observando un mayor desplazamiento para la cepa Xcc salvaje. La capacidad de adhesión a superficies bióticas sobre hojas de naranjo y abióticas en placas de poliestireno se determinó por tinción de las bacterias adheridas con cristal violeta y posterior cuantificación por medidas de absorbancia a 540 nm. La formación de biofilms de las cepas salvaje y mutante transformadas con un plásmido que expresa la proteína verde fluorescente GFP se analizó, luego de la incubación estática de las suspensiones bacterianas, mediante microscopía confocal laser. Estos ensayos permitieron demostrar que la proteína Hfq está implicada en el control de estos procesos bacterianos en Xcc. También se evaluó la sobrevida de las bacterias en medio líquido SB luego del tratamiento con H2O2, observándose una mayor inhibición del crecimiento en la cepa mutante XccΔhfq. En este contexto se realizaron geles nativos revelados para actividad catalasa mostrando una menor actividad enzimática la cepa mutante. Por otro lado, también se analizó la interacción de XccΔhfq con plantas de naranjo, para ello las hojas de naranjo fueron infiltradas utilizando una jeringa sin aguja con suspensiones bacterianas de las tres cepas estudiadas. Se observó una reducción en los síntomas de la enfermedad para la cepa mutante comparada con la cepa salvaje de Xcc. En todos los ensayos se realizaron tres réplicas biológicas independientes y los datos fueron representados como la media ± error estándar de las mismas (p≤ 0,05). Estos resultados indican que la proteína Hfq de Xcc podría estar involucrada en la regulación de sARNs que participan en procesos relacionadas con la virulencia de la bacteria.