Estudios morfoanatómicos de la raíz y lámina foliar de Arabidopsis thaliana inoculada con Gluconoacetobacter diazotrophicus

MARTÍNEZ, MARÍA L.; TANO, JOSEFINA; ORELLANO, ELENA G.; RODRIGUEZ, MARÍA V.; FERRETTI, MATÍAS D.; CORTADI, ADRIANA A.; ANSALDI, NAZARENA; CAMPAGNA, MARÍA N.; CARRAU, ANALÍA

Rosario

Jornada; XI Jornadas de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Rosario; 2017

Secretaria de Ciencia y Tecnología- Universidad Nacional de Rosario

Gluconoacetobacter diazotrophicus Pal5 es una bacteria Gram negativa, considerada un modelo pionero de bacteria endófita fijadora de nitrógeno, la cual pertenece a las llamadas PGPBEs (Plant-Growth-Promoting Bacterial Endophytes). Fue aislada por primera vez de las raíces y los tallos de caña de azúcar a través de estudios de cultivares de varias regiones de Brasil, los resultados mostraron su capacidad para fijar el nitrógeno con alta tolerancia a la acidez asociado a las plantas. Además de la caña de azúcar, coloniza otras plantas como café, piña y arroz. El objetivo del presente trabajo fue analizar la interacción de G. diazotrophicus Pal5 (Gb) con plantas de Arabidopsis thaliana para establecer condiciones adecuadas in vitro y en tierra de esta bacteria actuando como endófita. Para cumplir con el objetivo del presente trabajo se realizaron estudios morfoanatómicos de las raíces y láminas foliares de A. thaliana inoculadas con Gb a diferentes concentraciones de inóculo y distintas estrategias metodológicas: 1- Se crecieron in vitro plántulas durante 7 días las cuales se inocularon con dos concentraciones de la cepa Pal5 (104 Unidades Formadoras de Colonias (UFC/mL) y 106 UFC/mL) 3 h. Luego se realizó un lavado con agua estéril y las plántulas se mantuvieron en medio MS 0,5X, suplementado con 1,5% (p/v) sacarosa; 0,8% (p/v) agar a 22ºC; 16h luz/8h oscuridad; 2- Se crecieron in vitro plántulas 7 días y se inocularon 3 h con 106 UFC/mL de la cepa Pal5, posteriormente se realizó un lavado con agua estéril y se aclimataron las plántulas en tierra. Se evaluaron diferentes parámetros de crecimiento y se tomaron muestras de las plantas control e inoculadas a diferentes días post inoculación (dpi), se fijaron en FAA (50% etanol, 5% ácido acético glacial, 30% formaldehido, 15% agua), se incluyeron en parafina, se cortaron raíces y láminas foliares a 12 µm de espesor y se tiñeron con safranina-fast green. A los 9 dpi las plántulas del tratamiento 1 inoculadas con 106 UFC/mL de Gb estaban cloróticas observándose colonias bacterianas distribuidas en toda la superficie de las placas de Petri y en alta proporción en las raíces. Los pelos radicales presentaban daños y había menor cantidad que en plantas no tratadas. Los cortes transversales mostraron agregados bacterianos en contacto con la endodermis debido a que parte del parénquima cortical de la raíz estaba roto. Las plántulas del tratamiento 1 inoculadas con 104 UFC/mL de Gb, se observaban exomorfológicamente sanas, con hojas verdes y sin colonias bacterianas. La observación con microscopio estereoscópico mostró algunas colonias asociadas a la raíz, principalmente en los sitios donde emergen las raíces laterales; en las proximidades del ápice radical y en los pelos radicales. Por el contrario las plántulas del tratamiento 2 inoculadas con 106 UFC/mL de Gb presentaron una evolución favorable observándose a los 21 dpi plantas con mayor número de hojas, mayor superficie foliar y raíces principales de mayor longitud que en las plantas control. Estos resultados sugieren que la cantidad de inóculo de endófito es un factor importante para lograr la colonización de la planta de acuerdo al tratamiento empleado.