AISLAMIENTO DE BACTERIAS LÁCTICAS DE RUMEN BOVINO. ANALISIS POR RAPD-PCR.

BLANCATO, VICTOR S.; BLANCATO, VICTOR S.; PEREZ, C.; PEREZ, C.; MAGNI, C; MAGNI, C

Rosario.

Jornada; XI Jornada de Ciencia y Tecnología UNR.; 2017

Universidad Nacional de Rosario.

Dentro de la República Argentina, la provincia de Santa Fe constituye uno de los núcleos productivos más importantes del país ya que dispone de materia prima y de empresas vinculadas a la elaboración de alimentos derivados de lácteos y carnes. La creciente demanda de alimentos en cantidad y calidad, producto del crecimiento demográfico global, presenta una oportunidad y a la vez un reto para los pequeños y medianos productores de proteína animal de alto valor agregado. Los microorganismos del rumen son partícipes esenciales en la producción de azucares simples a partir de material vegetal fibroso, constituido por polisacáridos estructurales, y proveen un ambiente apropiado para microorganismos simbióticos gastrointestinales. La composición de microorganismos del rumen cambia con la edad y dieta del rumiante. Este cambio puede asociarse con la eficiencia de utilización de diferentes matrices alimentarias, afectando así el rendimiento de kg de carne o litro de leche producido por kg de matriz consumida. También afecta la interacción huésped-hospedador de organismos patógenos, lo que disminuye la previsibilidad productiva modificando la ecuación económica del productor. Las tecnologías de secuenciación de alto rendimiento permiten realizar un estudio completo de este tipo de comunidades conteniendo microorganismos no cultivables y rutas metabólicas novedosas. Sin embargo, el costo y equipamiento informático, personal capacitado y tiempo de análisis no provee un marco atractivo de inversión en I+D+I para los productores bovinos o de alimentos balanceados. Considerando este panorama, se propuso desarrollar una metodología simple para el análisis de la diversidad microbiana del rumen mediante técnicas sencillas de aislamiento, clasificación y tipificación. Para esto se realizaron cultivos y aislamientos de colonias en anaerobiosis utilizando medios LB y MRS. Las colonias obtenidas fueron clasificadas por tinción de Gram y actividad catalasa. A partir de ADN extraído de esas colonias se seleccionó y optimizó un protocolo para RAPD-PCR logrando patrones de amplificación definidos y reproducibles en geles de agarosa. De los aislamientos en medio MRS se analizaron 12 colonias, siendo 11 catalasa positiva, la observación microscópica y tinción de gram mostró que todas eran gram positivas, 2 colonias formadas por cocos y el resto estreptococos, para todas ellas se obtuvieron perfiles de RAPD diferentes. De los aislamientos en medio LB se analizaron 16 colonias, siendo 9 catalasa positiva y 7 catalasa negativa, la observación microscópica y tinción de gram mostró que todas eran gram positivas, una colonia con morfología de cocos, 6 de estreptococos y el resto bacilos, se obtuvieron 14 perfiles de RAPD diferentes indicando que tres tendrían un mismo origen. De esta manera se logró establecer exitosamente un protocolo de trabajo con técnicas simples que permite diferenciar microorganismos con morfología de colonia y fenotipo similar. Los patrones de amplificación de RAPD junto con técnicas microbiológicas básicas, permitirán comparar la composición de microorganismos del rumen en distintas muestras. El protocolo desarrollado abre un nuevo panorama de estudio de bajo costo y equipamiento que abarca áreas como: estudio y tipificación de nuevas especies y sub especies, medicina veterinaria, el descubrimiento de nuevas enzimas para procesos industriales y, desarrollo de una gran variedad de productos a medida relacionados con la nutrición animal a partir de matrices alimentarias de bajo costo y calidad.