HTLV-1 Y EFECTORES DE POLARIDAD CELULAR: INTERFERENCIA DE LA PROTEINA VIRAL TAX CON LA EXPRESION DE DLG1

MARZIALI F, BUGNON VALDANO M, BRUNET AVALOS C, MORIENA L, CAVATORTA AL Y GARDIOL D.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

AAM

El virus de la leucemia humana de células T tipo 1 (HTLV-1) se encuentra distribuido por todo el mundo, con zonas endémicas en Sudamérica. El 3-5% de la población infectada desarrolla leucemia aguda de células T o alternativamente Paraparesia espástica tropical, una enfermedad neurodegenerativa. La proteína viral Tax cumple un rol esencial en la patogénesis asociada al HTLV-1, reproduciendo por sí misma muchas características de estas patologías. Inicialmente, Tax fue descripta como una proteína nuclear transactivadora de genes relacionados a la proliferación e inhibición de la apoptosis. Sin embargo, luego se reportó su expresión en citoplasma, localizándose en distintos compartimientos. Más aun, se demostró su liberación al medio extracelular, actuando como citoquina sobre células no infectadas. Tax desarrolla sus actividades a través de interacciones con ligandos celulares, y en esta categoría resaltan las proteínas con dominios PDZ (PSD-95, DLG1, ZO-1), esenciales en el mantenimiento de la polaridad celular y con funciones oncosupresoras. Al momento, es incierto el rol de estas asociaciones, solo habiéndose sugerido como mecanismo para anular dichas funciones oncosupresoras. En este trabajo estudiamos profundamente la relación de Tax con human Disc large (DLG1), una proteína PDZ de polaridad reportada inicialmente como supresora de tumores y demostrada recientemente con funciones oncogénicas bajo ciertos contextos biológicos. Aquí, por western blot observamos que la expresión conjunta de Tax y DLG1 en células epiteliales HEK293 provoca una redistribución de DLG1 hacia la fracción insoluble. En forma paralela, mediante microscopía confocal apreciamos un patrón de co-localizacion mayoritario en zonas cercanas al núcleo y demostramos la interacción directa in vivo entre las proteínas por microscopía FRET. Como próximo paso analizamos la naturaleza de las estructuras intracelulares evaluando co-localización con marcadores de distintos compartimientos subcelulares. Así, luego de descartar co-localización en endosomas tempranos y tardíos, y autofagosomas, demostramos que la interacción Tax-DLG1 ocurre en la zona del aparato de Golgi asociada al centrosoma. Estos resultados fueron finalmente reproducidos en la línea celular Jurkat, confirmándose su relevancia en el modelo linfoide. De este modo, la asociación Tax-DLG1 además de interferir en la correcta localización de DLG1, podría estar relacionada a procesos de transporte de la proteína viral o modulación de actividades del centrosoma, esto último esencial durante la transmisión viral a células no infectadas. En conclusión, este trabajo contribuye a ampliar el entendimiento del rol de las proteínas de polaridad en el contexto de la infección con HTLV-1.