Estudio de la expresión de proteínas de HPV en el microambiente epitelial y su relación con el desarrollo de patologías cervicales

ANA LAURA CAVATORTA; LUCÍA MORIENA; GUIDO BARBIERI; MARINA BUGNON VALDANO; FEDERICO MARZIALI; PAULA DIZANZO; ENRIQUE BOCCARDO; DANIELA GARDIOL.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

AAM

La infección por papilomavirus humanos (HPV) mucosotrópicos de alto riesgo es el evento clave en el desarrollo de los carcinomas de cuello de útero y de las lesiones neoplásicas precursoras. Los HPV infectan las células basales del epitelio estratificado y su ciclo de replicación está coordinado con el programa de diferenciación de las células epiteliales, así las diferentes proteínas virales se expresan diferencialmente en los distintos estratos del epitelio. La capacidad de transformación celular de los HPV está codificada en un preARNm policistrónico, donde un evento de splicing alternativo conduce a la traducción de las oncoproteínas E6, E7 y E6 estrella. Poco se conoce de la expresión diferencial de una u otra isoforma de E6 durante la diferenciación del epitelio y, por tanto, de los posibles efectos sobre el desarrollo de las lesiones cervicales. Asimismo, otra proteína de HPV, la proteína E4, es considerada un biomarcador de infección viral activa ya que se expresa en altos niveles en las células, en las cuales existe amplificación del genoma viral y producción de viriones. La ausencia de dicha proteína viral en lesiones cervicales, podría relacionarse a una pérdida de la replicación viral a expensas de la transformación celular y, por ende, probabilidad de progresión a cáncer. El objetivo de este trabajo consistió, por un lado, en evaluar la expresión de las diferentes isoformas de E6 de HPV18 a lo largo del epitelio mediante metodología de PCR en tiempo real. Dada la dependencia de la diferenciación del tejido infectado por parte de HPV, desarrollamos cultivos epiteliales organotípicos tipo raft, los cuales reproducen fielmente el proceso de diferenciación epitelial in vitro. Utilizando la técnica de microdisección por captura láser, discriminamos cada uno de los estratos de este tejido expresando las oncoproteínas virales y analizamos los patrones de expresión de las isoformas de E6 en cada capa del epitelio. Los resultados obtenidos sugieren que el proceso de diferenciación celular a lo largo del epitelio infectado va acompañado de un aumento tanto en la expresión de E6, como en el nivel de splicing de los transcriptos generados. Así, determinamos cambios en la expresión de los transcriptos de E6 de HPV18 a través de los distintos estratos de cultivos organotípicos que mimetizan la infección. Por otro lado, también evaluamos por inmunohistoquímica la expresión de la proteína E4 de HPV en biopsias derivadas de lesiones cervicales de distinta severidad. Los resultados obtenidos muestran una distribución diferencial de E4 en las distintas lesiones cervicales intraepiteliales analizadas, sugiriendo su potencial uso para la definición diagnóstica de los diversos grados de severidad de la enfermedad. Esto resulta muy importante como prueba adicional en los algoritmos diagnósticos actuales, dado que la distinción entre una enfermedad cervical de alto y bajo grado, determina finalmente las opciones de tratamiento y el manejo de las pacientes.