Estudio del efecto de las proteínas virales E6 y E7 de HPV sobre la expresión de la proteína de polaridad celular DLG1

DIZANZO M. P., MARZIALI F., BRUNNET AVALOS C., MORIENA L., CAVATORTA A. L., GARDIOL D.

Rosario

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

AAM

Los procesos tumorales desarrollados por infecciones de virus oncogénicos, están relacionados con la desregulación de la expresión de proteínas de polaridad celular. Estas proteínas garantizan la correcta división, morfología y proliferación celular. En particular la proteína DLG1 (Disc Large 1), que localiza principalmente en las uniones adherentes y está asociada al control de la proliferación, se ve afectada durante el desarrollo tumoral en cuanto a sus niveles de expresión y a su localización. Los virus del papiloma humano (HPV) de alto riesgo oncogénico se asocian al desarrollo del cáncer cervical y se conoce que la oncopreoteína viral E6 de HPV es capaz de interaccionar con dominios PDZ presentes en reguladores de polaridad como DLG1, a través de un motivo de unión a PDZ. En nuestro grupo demostramos que la expresión de DLG1 en cultivos organotípicos raft expresando las proteínas E7 y E6/E7 de HPV, produce una redistribución de DLG1 desde los bordes celulares hacia el citoplasma, así como un aumento de sus niveles. Estos resultados coinciden con estudios previos utilizando biopsias de pacientes con lesiones precursoras de carcinoma cervical.A posteriori nos propusimos entender la incumbencia de las proteínas virales en los cambios observados para DLG1. A través de técnicas de inmunofluorescencia, estudiamos la expresión de DLG1 en presencia de E6 de HPV, pudiendo detectar la redistribución de DLG1 hacia el citoplasma celular. Encontramos, además, que una sobreexpresión de DLG1 causa un impacto en la localización de E6, con una redistribución desde el núcleo al citoplasma y borde celular de manera PDZ dependiente. Ante niveles endógenos de expresión de DLG1, E6 se encontró localizada en el núcleo y el citoplasma, lo que indicaría que la sobreexpresión de DLG1 es responsable de dicha deslocalización de E6, probablemente por la formación de complejos E6-DLG1 en el citoplasma. Para corroborar dicha interacción entre DLG1 y E6 llevamos a cabo experimentos aplicando la técnica de microscopía de fluorescencia FRET. En este sentido, detectamos por primera vez que existe una interacción directa entre E6 y DLG1 dentro de la célula.Teniendo en cuenta nuestros hallazgos en cultivos organotípicos, estudiamos la contribución de la expresión de E7 sobre la expresión de DLG1. Mediante ensayos de inmunofluorescencia y evaluando los niveles de expresión de DLG1 en las distintas fracciones de extractos proteicos celulares en presencia de E7 y E6/E7, observamos que la expresión conjunta de E6 yE7 induce la deslocalización y un aumento en los niveles de DLG1. Estos resultados sugieren que las oncoproteínas virales promueven la estabilización de DLG1 en el citoplasma con probables cambios en sus funciones oncosupresoras. Así, este trabajo contribuye al entendimiento de la expresión diferencial de DLG1 durante el desarrollo oncogénico asociado a HPV.