La característica de lipoproteína de las carbapenemasas adquiridas tipo-OXA de Acinetobacter baumannii permite su identificación en el laboratorio clínico

DIAZ S; VIALE AM; MORAN BARRIO J; LARINI S; MARCHIARO P; PEREZ J; LIMANSKY AS

Bahia Blanca

Jornada; XVII Jornadas Argentinas de Microbiología (JAM 2017); 2017

Asociación Argentina de Microbiología

La adquisición de resistencia (R) a carbapenemes en Acinetobacter baumannii multirresistente (AbMR), patógeno oportunista prevalente en infecciones nososomiales, constituye una problemática emergente. La principal causa de R a carbapenemes es la adquisición de genes de carbapenemasas tipo-OXA; y en menor frecuencia de metalo-β-lactamasas. Se evalúa aquí la utilidad del Tritón Hodge Test (THT, 1) para caracterizar OXAs adquiridas en AbMR. Se emplearon Ab ATCC 17978 como control, y transformantes portadoras de plásmido de alto número de copia, pWH1266, en el cual se clonaron blaOXA-58 y corriente arriba, promotores fuerte o débil. En el primer caso, el elemento que provee alta expresión de blaOXA-58 contiene ISAba3 interrumpida por ISAba825, y en caso del promotor débil, ISAba3. Se empleó además Ab17978 transformada con un plásmido indígena de bajo número de copias de un Ab clínico con blaOXA-58 bajo control del promotor fuerte. Se incluyeron 28 AbMR clínicos con R adicional a carbapenemes (AbMRC): 20 portadores de blaOXA-23, que constituyen 4 clones diferentes según métodos genotípicos; 4 clones diferentes con blaOXA-58; y 4 Ab con blaOXA-24, de un único clon. Se usaron como controles 4 Ab clínicas, y Ab17978, sensibles a carbapenemes, portadoras sólo de OXA constitutiva tipo-51. Se evaluó la producción de OXA empleando test de Hodge (H) y THT, ambos con suspensiones 0,5 Mc Farland de la cepa indicadora y meropenem como sustrato. Los ensayos mostraron que Ab17978, que exhibe THT (-), positivizó el ensayo cuando fue transformada con plásmidos con blaOXA-58, de bajo o alto número de copias, así como blaOXA-58 regulado por promotor débil o fuerte. Esto muestra que aún bajas actividades de OXA-58 son detectadas por THT; y que OXA-51 no contribuye al resultado. Las OXAs son lipoproteínas ancladas a membrana externa (ME) (2), y el tritón (T) favorece su detección (1). La evaluación del mecanismo de R para Ab con blaOXA-23 mostró que 16/20 con H (-) positivizaron el THT. Esto indica que el 80% de OXA adquiridas no fueron detectables según H (+ solo en 4/20). Los 4 Ab con blaOXA-24 resultaron THT (+), siendo 3/4 H (+). Por último, los 4 clones con blaOXA-58 exhibieron el ensayo (+) sólo en presencia de T. En concordancia, Ab17978 con plásmidos portadores de blaOXA-58 bajo control de un promotor débil, y aún en plásmidos de bajo número de copias, que exhiben H (-), positivizan el ensayo THT; mostrando así la eficiencia de detección de determinantes de R aún con bajos niveles de expresión. Así, H con 28 AbMRC clínicos resultó (+) sólo para 7 productores de OXA adquiridas. En contraposición, THT mostró 100% de detección, destacando la conveniencia de un ensayo simple para la detección de OXA transferibles. Esto permite confirmar el mecanismo de R de un patógeno oportunista nosocomial, así como evaluar epidemiológicamente un mecanismo potencial de diseminación entre Gram-negativos. 1- Pasteran F et al. JCM. 2016; 2- Morán Barrio J et al. ALAM-CAM 2016.