IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS INHIBIDORES DE BROMODOMINIOS DE Trypanosoma cruzi A PARTIR DE PRODUCTOS NATURALES MODIFICADOS

RUA F; RAMALLO IA; FURLAN RLE; ALONSO VL; SERRA EC

Santa Fe

Congreso; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias - SIMPOSIO Internacional de Biología Celular y Molecular de la Enfermedad de Chagas; 2016

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias

Los Bromodominios son los únicos dominios proteicos capaces de reconocer e interaccionar con lisinas acetiladas. Trypanosoma cruzi, el agente causal de la Enfermedad de Chagas, presenta un bromodominio atípico (denominado TcBDF3) capaz de interaccionar con la α-tubulina acetilada presente en el citesqueleto de este organismo. No existen reportes en otros eucariotas de Bromodominios con funciones fuera del núcleo, lo que hace a TcBDF3 un interesante blanco para el desarrollo de nuevas drogas tripanocidas. Recientemente, se han descripto nuevos compuestos inhibidores de Bromodominios humanos para el tratamiento de distintas patologías, demostrando que se trata blancos quimioterapéuticos válidos. Nos planteamos buscar nuevos quimiotipos capaces de interrumpir la interacción entre TcBDF3 y α-tubulina acetilada a partir de bibliotecas de productos naturales químicamente modificados y evaluar su potencial tripanocida en todos los estadios del ciclo de vida de T. cruzi.Contamos con un ensayo de atenuación de la fluorescencia en microplacas de 96 pocillos. El fundamento del método se basa en la modificación de la fluorescencia de triptófanos debida a la interacción de la proteína con un ligando ya que TcBDF3 presenta un triptofano en su bolsillo de unión al ligando acetilado. Con este ensayo se evaluó la presencia/ausencia de compuestos que se unen a TcBDF3 en 19 extractos diversificados químicamente pertenecientes a diferentes especies vegetales. Los mismos se prepararon sometiendo a reacción con exceso de clorhidrato de hidroxilamina en etanol reflujo por 4 hs a los respectivos extractos metanólicos. El extracto modificado de Paspalum dilatatum Poir (Poaceae) fue el que presentó mayor bioactividad. Su fraccionamiento bioguiado llevó al aislamiento e identificación de la oxima del (E)-4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído como responsable de la actividad observada. Luego se corroboró la interacción de este compuesto con TcBDF3 mediante Thermal Shift y se calculó la constante de disociación de esta interacción (0.3 µM). Por otro lado, se evaluó la actividad tripanocida de este compuesto en epimastigotes, tripomastigotes y amastigotes de T. cruzi, obteniéndose CI50 entre 5 y 10 µM según el estadio y un índice de selectividad de 6 sobre la línea celular Vero. Con estos resultados podemos concluir que TcBDF3 es una blanco quimioterapéutico interesante y el compuesto encontrado puede ser un punto de partida para la búsqueda de inhibidores con mejores actividades tripanocidas.