Identificación y evaluación de potenciales inhibidores de flavoproteínas de Xanthomonas citri subsp. citri

TONDO, M. LAURA; MARTÍNEZ-JÚLVEZ, MARTA; PETROCELLI, SILVANA; SANCHO, JAVIER; MOYANO, LAURA; ORELLANO, ELENA G.; VELÁZQUEZ-CAMPOY, ADRIÁN; MEDINA, MILAGROS

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología (ALAM-AAM); 2016

El cribado de altorendimiento (High-Throughput Screening)consiste en ensayar de forma masiva la unión o la inhibición de un gran númerode compuestos a una proteína diana específica a través de la medición de algunapropiedad de la proteína. El uso de quimiotecas ha permitido el descubrimientode inhibidores específicos, los cuales podrían utilizarse como potencialesagentes terapéuticos contra la infección por Helicobacter pylori y Leishmania mexicana.Xanthomonascitri subsp. citri (Xcc) es el agentecausal de la cancrosis de los cítricos, una de las enfermedades más severas queafecta al género Citrus. En trabajosprevios realizados en nuestro laboratorio se han estudiado flavoproteínas confunciones importantes en Xcc, entre las que se encuentran fotorreceptores de luzazul como LOV y BLUF, y la Ferredoxina-NADP Reductasa (FPR). El objetivo delpresente trabajo es la búsqueda de inhibidores de flavoproteínas de Xcc para elcontrol de la cancrosis de los cítricos utilizando quimiotecas comerciales. Serealizó el cribado de alto rendimiento de dos quimiotecas, una de 1120compuestos (Prestwick Chemical Library) para la proteína XccLOV y otra de10000 compuestos (Maybridge-Hitfinder) para las proteínas XccLOV y XccFPR.Para ello se monitoreó el desplazamiento de la estabilidad térmica de la proteína XccLOV recombinante en presencia de cada uno de loscompuestos presentes en las quimiotecas. Se calcularon las Tm promedio y losdesvíos estándar (ds) correspondientes a los controles de cada placa y secompararon con los valores de Tm obtenidos de los pocillos que contenían cadauno de los compuestos. Aquellos compuestos que causaron una disminución de laTm de la proteína de al menos 2 ds con respecto a los controles fueron consideradoscomo posibles desestabilizadores de las proteínas. El cribado de la proteínaXccFPR se realizó mediante inhibiciónde la actividad diaforasa. Parala proteína XccLOV se encontraron 20 compuestos en la quimioteca de Prestwicky 8 compuestos de la quimioteca de Maybridge, queserían posibles inhibidores de la actividad de esta proteína. Se seleccionaron 3 compuestos de la primerquimioteca para comenzar con los ensayos de inhibición del crecimientobacteriano. Por otra parte, se detectaron 43 potenciales inhibidores de XccFPR enla quimioteca de Maybridge y se analizó el efecto de los mismos de formaindividual sobre la proteína XccFPR mediante el ensayo de actividad diaforasa. Seseleccionaron 4 compuestos para realizar los ensayos de inhibición delcrecimiento bacteriano. Dos los compuestos inhibidores de XccLOV seleccionados mostraroninhibición del crecimiento de Xcc en placas de medio sólido. Estos compuestospresentaron actividad bactericida cuando se realizaron los ensayos de crecimientode Xcc en medio líquido. De los 4 compuestos inhibidores de XccFPR sólo 2mostraron inhibición del crecimiento bacteriano en medio sólido. Estoscompuestos inhibidores del crecimiento de Xcc podrían ser potenciales agentesbactericidas para el tratamiento de la cancrosis de los cítricos.