Estudio de la inmunogenicidad en ratones de la proteina VP8* de rotavirus utilizando como vehículo Lactococcus lactis

MARELLI B.E; ROMA S.M; DE MENDOZA D; MAGNI C; , PÉREZ A.R

La Falda, Córdoba

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

La infección por rotavirus es una causa importante de gastroenteritis en niños menores de 5 años edad y causa 600.000 muertes al año. La partícula viral adquiere más infectividad cuando la proteína VP4 de la cubierta es escindida en VP8* y VP5* por una proteasa intestinal. Además se sabe que anticuerpos contra el polipéptido VP8* son capaces de inhibir la infección del virus. El uso de bacterias no patógenas como vehículo para la administración oral de antígenos de interés terapéutico es un campo de investigación en constante crecimiento. En este contexto, el desarrollo de bacterias lácticas que expresen la proteína VP8* sería una herramienta útil en la inmunización oral contra rotavirus. En base a lo anterior, nuestro objetivo fue evaluar la inmunogenicidad de la proteína VP8* expresada en Lactococcus lactis. Para ello se construyeron cepas recombinantes, que expresan y acumulan la proteína VP8* en su citoplasma (LL-VP8cit) o bien la secretan al exterior (LL-VP8sec), ya que la diferente localización de VP8* podría afectar el reconocimiento de ésta por el sistema inmune. Con el fin de determinar la inmunogenicidad de la proteína VP8*, se inocularon por vía oral 5 grupos de ratones Balb/c (7-9 hembras/grupo). Dos grupos recibieron las bacterias recombinantes de interés: LL-VP8cit y LL-VP8sec (1´109 UFC). Los demás grupos fueron inoculados con: L. lactis  que no produce la proteína VP8* (LL); la proteína VP8* soluble obtenida a partir de los sobrenadantes de cultivo (VP8*); o solución salina (PBS). Los inóculos fueron administrados en tres etapas y en un intervalo de 35 días. Posteriormente se determinaron los niveles IgA e IgG específicas en lumen intestinal y plasma respectivamente (ELISA). También se evaluó histológicamente (hematoxilina/eosina) la estimulación producida a nivel de la mucosa intestinal. Los niveles de IgA fueron mayores en el grupo LL-VP8cit con respecto al grupo LL (DO; media±ESM: 2.3±0.10 vs. 1.9±0.06, p<0.03) y los demás grupos controles (p<0.03), mientras que no se observó respuesta en el grupo LL-VP8sec. Además, no se detectaron en ningún caso niveles significativos de IgG específica. A nivel de mucosa intestinal, se observó un aumento de folículos linfoides en los grupos LL-VP8cit, LL-VP8sec y LL, respecto de VP8* soluble y PBS, que estaría asociado al reconocimiento y procesamiento de L. Lactis. En conclusión, estos resultados sugieren que LL-VP8cit sería un buen candidato para el desarrollo de una vacuna oral contra rotavirus.