Regulación de la expresión de proteínas de polaridad celular durante infecciones del virus del papiloma humano.

BUGNON VALDANO MARINA; CAVATORTA ANA LAURA; MARZIALI, FEDERICO; BARBIERI, GUIDO; FACCIUTO FLORENCIA; BOCCARDO, ENRIQUE; GARDIOL, DANIELA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología. II Congreso Latinoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Virología

La polaridad de celular está determinada por una distribución asimétrica y muy regulada de proteínas y lípidos asociados a membrana. La pérdida de dicha polaridad y la consecuente alteración de las uniones celulares son características delos procesos carcinógenos. Por eso, estamos interesados en estudiar los diferentes mecanismos que regulan la expresión de proteínas de polaridad, considerando especialmente los procesos neoplásicos asociados a infecciones del virus delpapiloma humano (HPV). Los HPV infectan epitelios de una gran variedad de sitios anatómicos, y se clasifican como de bajo o alto riesgo oncogénico, según las manifestaciones clínicas asociadas. Entre los blancos celulares de HPV se cuentana varias proteínas PDZ de polaridad, incluyendo a la proteína Disc Large (DLG1), con funciones tanto estructurales como de señalización. La expresión de DLG1 está alterada en diversos tumores, y en particular en el cáncer cervical, siendo losHPV de alto riesgo oncogénico agentes etiológicos de dicha patología.Para estudiar los mecanismos precisos involucrados en la regulación de DLG1 durante los procesos neoplásicos asociados a HPV, en el presente trabajo generamos cultivos organotípicos tipo RAFT, que reproducen el proceso de diferenciaciónepitelial in vitro, y que por tanto constituyen herramientas muy útiles para el estudio de mecanismos asociados a infecciones por virus epiteliotrópicos, como el HPV. En particular, desarrollamos cultivos RAFT a partir de queratinocitosprimarios expresando las proteínas E7 y E6/E7 de HPV18 (de alto riesgo) y de HPV11 (de bajo riesgo). Corroboramos la expresión de los correspondientes transcriptos virales en los cultivos RAFT generados mediante la metodología de RTPCR.Luego, analizamos la expresión de DLG1 en cada caso, mediante las técnicas de Western Blot (WB) e Inmunohistoquímica (IHQ). Los resultados mostraron que la expresión de DLG1 es desregulada en los cultivos expresando E7 y E6/E7de HPV18 y de HPV11. En particular, encontramos un aumento en los niveles de expresión de la proteína celular y un cambio en su distribución ante la expresión de las proteínas virales. Observamos en todos los casos una redistribución deDLG1 hacia el citoplasma. Específicamente para el caso de los cultivos expresando proteínas de HPV 18, encontramos una evidente pérdida de DLG1 a nivel de los bordes celulares, y siendo esto aún más marcado para el caso de los cultivosexpresando E6/E7 de HPV18.Más aún, mediante cultivo celular tradicional y WB, observamos que la expresión exógena en células de la línea 293 de las proteínas virales E7 y E6/E7 (de HPV 18 y HPV 11) también genera un aumento en los niveles de expresión de DLG1.En conjunto, hemos analizado la expresión de proteínas celulares blanco de HPV en un contexto que asemeja a las infecciones virales. Estos datos sugieren que las proteínas virales podrían contribuir a los cambios en la expresión de DLG1previamente observados en biopsias.