VALIDACIÓN DEL RECUENTO DE EPIMASTIGOTES DE Trypanosoma cruzi

NOCITO, ISABEL; MINGO, NOELIA; MANARÍN, ROMINA; CORTADI, ADRIANA; ALONSO, VICTORIA

Mar del Plata

Congreso; X Congreso de Protozoología y enfermedades parasitarias; 2014

Sociedad Argentina de Protozoología

Con el propósito de reducir los tiempos de recuentos de epimastigotes de Trypanosoma cruzi en el screening de compuestos, nos propusimos comparar los resultados obtenidos mediante cámara de Neubauer con respecto al uso de un contador hematológico automatizado. Para esto se utilizó el equipo WL 19 Counter AA (Weiner Lab), diseñado para el recuento diferencial de leucocitos, glóbulos rojos y plaquetas. Después de ajustar ciertas variables en el equipo (reemplazo del reactivo lisante por agua destilada, ajuste de la ganancia del canal de leucocitos y cambios de unidades), observamos que los epimastigotes eran detectados correctamente dentro de la población de leucocitos. Diseño experimental: Se utilizaron epimastigotes de la cepa Dm28c los cuales se trataron durante 72 horas con extractos vegetales. Luego, los parásitos, previamente fijados en formaldehído al 3,7% y homogenizados, se contaron en cámara de Neubauer y en el contador automatizado. Además, se registraron los posibles cambios morfológicos por observación directa y/o coloración Giemsa. Resultados: Se evaluó el efecto de diferentes concentraciones (5 a 100 μg/mL) de 2 extractos vegetales de la especie Myrsine Parvifolia provenientes de fruto (A) y tallo (B). El extracto A disminuyó significativamente el crecimiento de los parásitos respecto de los parásitos control en todas las concentraciones empleadas. Sin embargo, el extracto B resultó ser poco efectivo. Como control se utilizo Benznidazol, la droga utilizada actualmente para el tratamiento de la Enfermedad de Chagas (0-20 μM) y se calculo su CI50, el cual fue comparable al reportado en la literatura. El recuento parasitario en todas las condiciones fue similar mediante ambas metodologías. Conclusión: Es posible reemplazar el recuento manual por el contador automático, ya que no hay diferencias significativas entre ambos métodos. Además, la reducción del tiempo de trabajo fue muy considerable, pudiendo evaluar un gran número de compuestos simultáneamente.