An¨¢lisis de la selectividad de operadores entre los regulones hom¨®logos cue y gol de Salmonella

MAURICIO J. GRISOL¨ªA; BRENDA M. PODOROSKA; MAR¨ªA E. P¨¦REZ AUDERO; FERNANDO C. SONCINI

Rosario

Congreso; IX Congreso y XXVII Reuni¨®n Anual; 2007

Sociedad de Biolog¨ªa de Rosario

En nuestro laboratorio ha sido caracterizado un locus espec¨ªfico de Salmonella, que codifica para un regulador de tipo MerR (GolS), con alta homolog¨ªa con el regulador ancestral de reconocimiento de cobre CueR, una ATPasa transportadora de metal (GolT), y un polip¨¦ptido hom¨®logo a chaperonas de cobre (GolB), y demostramos que este locus media el monitoreo y la detoxificaci¨®n de sales de oro. GolS interacciona con los promotores de sus genes blanco, reconociendo una diada sim¨¦trica ubicada entre los elementos -35 y -10 de estos promotores. Esta regi¨®n es altamente hom¨®loga a los operadores reconocidos por CueR. Observamos mediante ensayos in vitro que tanto GolS como CueR son capaces de interaccionar no s¨®lo con sus genes blanco (golTS y golB para GolS, y copA y cuiD para CueR) sino tambi¨¦n con los promotores de los genes del otro regul¨®n, aunque con una afinidad marcadamente menor. Decidimos analizar la presencia de determinantes de selectividad presentes en cada grupo de operadores que medien la discriminaci¨®n del regulador. Para esto, clonamos promotores regulados por GolS y por CueR delante del gen reportero lacZ, que codifica para la enzima ¦Â-galactosidasa, en el pl¨¢smido pMC1871 y ensayamos su expresi¨®n en Eschericiha coli, ya que esta bacteria s¨®lo posee codificado en su genoma a cueR, y carece de todos los genes del regul¨®n gol, incluyendo a golS. Observamos expresi¨®n del gen reportero por el agregado de sales de cobre o de oro s¨®lo en las cepas transformadas con pl¨¢smidos conteniendo promotores reconocidos por CueR, y no por GolS. Este reconocimiento es espec¨ªfico, ya que no se observ¨® expresi¨®n desde estos pl¨¢smidos en una mutante en la que delecionamos a cueR. Para verificar la selectividad de reporteros, incorporamos una copia salvaje del gen golS en la cepa delecionada en cueR. Por ¨²ltimo, generamos promotores con mutaciones puntuales en los sitios probables de selectividad, y observamos una reversi¨®n de la selectividad. Todos estos ensayos nos permitieron identificar las determinantes de selectividad de regulador codificadas en los operadores de cada regul¨®n que permiten la discriminaci¨®n entre regulones altamente hom¨®logos.