Caracterización molecular de Pseudomonas aeruginosa productoras de metalobetalactamasas en un hospital de tercer nivel

GALICIA-VELASCO, M.; BERMEJO-MORALES, K.; ADRIANA SARA LIMANSKY; QUIÑONES-FALCONE, F.

Aguascalientes

Congreso; Congreso Anual de la Asociación Mexicana de Infectología y Microbiología Clínica.; 2007

El objetivo ha sido determinar la clonalidad en aislados de Ps. aeruginosa resistentes a carbapenems productores de metalobelactamasas ( MBLs ). Se evaluaron 433 cepas de Ps. aeruginosa aisladas de muestras clínicas durante el periodo Enero de 2005 a Septiembre de 2006. La susceptibilidad a carbapenems fue evaluada por la técnica de microdilucion en caldo de acuerdo a los lineamientos de la CLSI,  considerando resistentes aquellas con un CIM  ³ 8ug/ml. La expresión de MBLs se evaluó por la técnica de extracción enzimática; brevemente, sobre una placa de agar Mueller-Hinton inoculada con la cepa E.coli ATCC 25922 (susceptible a carbapenems), se colocaron cinco discos impregnados como se describe a continuación, a) IMP (10ug), b)20ul de extracto enzimático (obtenido por choques térmicos a partir de un cultivo puro de 24 hrs. en agar Mueller Hinton), c) 20ul de la mezcla del extracto enzimático y sulfato de zinc, d)20 ul de la mezcla del extracto enzimático y EDTA 0.5M, e) 20ul de buffer Tris HCL, el disco de IMP se coloco en el centro rodeado los 4 discos restantes en un diámetro de 22 mm. El desarrollo de colonias bacterianas alrededor de los discos b) y c) y ausencia de crecimiento en el disco d) y e) se interpreto como productora de metalobetalactamasas. Los aislados fueron digeridos con SPE 1 (10u) y sometidos a electroforesis de campos pulsados (CHEF MAPPER (BIO RAD). De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   eterminar la clonalidad en aislados de Ps. aeruginosa resistentes a carbapenems productores de metalobelactamasas ( MBLs ). Se evaluaron 433 cepas de Ps. aeruginosa aisladas de muestras clínicas durante el periodo Enero de 2005 a Septiembre de 2006. La susceptibilidad a carbapenems fue evaluada por la técnica de microdilucion en caldo de acuerdo a los lineamientos de la CLSI,  considerando resistentes aquellas con un CIM  ³ 8ug/ml. La expresión de MBLs se evaluó por la técnica de extracción enzimática; brevemente, sobre una placa de agar Mueller-Hinton inoculada con la cepa E.coli ATCC 25922 (susceptible a carbapenems), se colocaron cinco discos impregnados como se describe a continuación, a) IMP (10ug), b)20ul de extracto enzimático (obtenido por choques térmicos a partir de un cultivo puro de 24 hrs. en agar Mueller Hinton), c) 20ul de la mezcla del extracto enzimático y sulfato de zinc, d)20 ul de la mezcla del extracto enzimático y EDTA 0.5M, e) 20ul de buffer Tris HCL, el disco de IMP se coloco en el centro rodeado los 4 discos restantes en un diámetro de 22 mm. El desarrollo de colonias bacterianas alrededor de los discos b) y c) y ausencia de crecimiento en el disco d) y e) se interpreto como productora de metalobetalactamasas. Los aislados fueron digeridos con SPE 1 (10u) y sometidos a electroforesis de campos pulsados (CHEF MAPPER (BIO RAD). De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.   De un total de 433 cepas de P. aeruginosa, el 3 %  fueron productoras de MBLs, el 63% fueron aislados de la unidad de cuidados intensivos. El análisis del PFGE nos indica que la distribucuón es policlonal, la similitud general es del 62%, encontrándose cepas clonales tales como 6 y 7, 10 y 12, 11 y 13. La cepa 2 es la mas lejana con 39% de similitud de ahí la cepa 3 da origen a los dos clados principales con una similitud del 60%,, 10 de las cepas de Pseudomas aeruginosa estudiadas poseen una similitud mayor al 80%.