Esplicing alternativo: Mecanismo ancestral para la sintesis de hexosaminidasa?

MORALES E S; KRAPF D; BANCHIO, C; ARRANZ SE

Chascomus

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad de Biología Argentina; 2013

La N-ac-glucosaminidasa (Hex) ha sido vinculada a diversos procesos metabólicos. En los mamíferos existen tres isoformas originadas por la dimerización de dos subunidades distintas ( y ), codificadas en dos genes diferentes, cuya actividad específica depende de la diferencia en dos aminoácidos de los doce que componen sus sitios activos. En nuestro laboratorio caracterizamos el gen de Hex de anfibios. Análisis bioinformáticos y de los transcriptos reportados mostraron que las subunidades  y podrían generarse a partir de un único gen por el splicing alternativo de 2 exones que determinan la posterior identidad  o del sitio activo. Uno de los transcriptos de este gen (GenBank: JN127371; X.laevis), codificante para un sitio activo compatible con una subunidad fue clonado con el objetivo de lograr su expresión y posterior análisis de su actividad y analizar la correlaciónestructura-actividad. Para ello sub-clonamos el cDNA en el vector pcDNA3 y lo transfectamos en células CHO. Experimentos de Western-blot revelaron la expresión de un polipéptido del tamaño esperado (XXkDa) sólo presente en los cultivos transfectados con pcDNA3-JN127371. Utilizando sustratos capaces de discriminar entre la actividad de ambas sub-unidades se verificó un aumento significativo en la actividad sólo en los extractos provenientes de estas células Nuestros resultados han corroborado bioquímicamente que el gen caracterizado corresponde a una Hex y que el cDNA obtenido a una sub-unidad ; esto aporta pruebas sobre el posible origen evolutivo común de los genes que codifican para ambas subunidades en los mamíferos.