LA MOTILIDAD EN ESPERMATOZOIDES DE ANUROS CORRELACIONA CON LA FOSFORILACIÓN PKC-DEPENDIENTE DE ATP-SINTETASA Y LA ACTIVACIÓN DE CALCINEURINA

MAIDAGÁN, PM; KRAPF D; MORALES E S; O'BRIEN ED; VISCONTI PE; ARRANZ SE

Congreso; Reunion anual de la Sociedad de Biología Argentina; 2013

Objetivos. Los espermatozoides de anfibios sufren la activación de la motilidad ante un shock hipoosmótico. Estos procesos se encuentran asociados a eventos de fosforilación dependientes de PKA. Recientemente hemos identificado una vía de fosforilación/defosforilación de sustratos de PKC también asociada a la motilidad espermática y regulada por PKC/Calcineurina. El objetivo del presente trabajo fue avanzar en la identificación y caracterización de esta vía y su relación con la vía dependiente de PKA. Métodos. Fraccionamiento sub-celular de espermatozoides, Western Blot, Inmunocitoquímica, Estudios de motilidad, Medición enzimática de [ATP], espectroscopía de masa en tandem. Resultados. Se observó que durante el shock hipoosmótico, la enzima ATP-sintetasa se fosforila por PKC. Aún así, esta fosforilación correlaciona con una disminución de los niveles de ATP asociada a la adquisición de la motilidad. Equitemporalmente, el shock hipoosmótico produjo la defosforilación de sustratos de PKC presentes en el flagelo. Ensayos farmacológicos utilizando Ciclosporina-A permitieron demostrar que esta defosforilación es mediada por la fosfatasa calcineurina, y que la inhibición de la misma previene la activación del flagelo. Conclusiones. Nuestros resultados indican que tanto la desfosforilación de sustratos de PKC mediada por calcineurina en el flagelo, como la fosforilación por PKC de la ATP sintetasa, son eventos necesarios para la activación de la motilidad espermática en Rhinella arenarum. Tópico temático. Biología de la Reproducción Cuatro palabras clave. PKC, calcineurina, capacitación del espermatozoide, shock-hipoosmótico.