Deteccion de integrina beta 1 en ovocitos y efecto de su peptido blanco RGDS en la fecundacion del sapo criollo (Bufo arenarum).

MOUGUELAR, V. S.; CABADA, M. O.; GABRIELA COUX

Rosario

Congreso; VIII Congreso-XXVI Reunion anual de la Sociedad de Biologia de Rosario; 2006

Sociedad de Biologia de Rosario

En el anfibio B. arenarum el espermatozoide interacciona con la cubierta gelatinosa del ovocito y luego se une a la cubierta vitelina (matriz extracelular que rodea al ovocito). Esta interacción dispara la reacción acrosómica, que a su vez, le permite al espermatozoide atravesar la cubierta. Luego, el espermatozoide reaccionado se aproxima, une y finalmente fusiona con la membrana plasmática del ovocito. Este último paso ha sido el foco de nuestros estudios previos, donde detectamos proteínas de membrana plasmática de ovocitos con afinidad por espermatozoides. Una de estas, de aproximadamente 100 kDa, presento además, una interacción aparente con péptidos de la familia RGD (péptido blanco de integrinas b1 principalmente). Nuestros objetivos fueron analizar el efecto del péptido RGDS en el medio de fecundación y detectar la presencia de integrina b1 y su localización subcelular en ovocitos. Se utilizaron ejemplares de sapos adultos y se obtuvieron sus gametas por métodos estándar de nuestro laboratorio. Se realizaron ensayos de fecundación in vitro utilizando concentraciones crecientes de espermatozoides (104, 5. 104, 105, 3.3 .105 y 106 células/ml) en presencia RGDS 1 mM y en su ausencia (control negativo). En todas las concentraciones de espermatozoides utilizadas el control presentó un porcentaje mayor de fecundación que en presencia de RGDS, siendo máxima y significativa esta diferencia con 3.3 .105 cel/ml (en porcentajes de fecundación promedio ±SEM: control= 70,8±9,9 , RGDS=43,4±10,9, n=4, p<0.05). Mediante centrifugación diferencial se aislaron las fracciones citosólica, microsomal y de membrana plasmática de ovocitos maduros. Muestras de estas fracciones se sometieron a SDS-PAGE. Los geles se electrotransfirieron a membranas de nitrocelulosa y se detectó la presencia de integrina b1 mediante el anticuerpo 8C8 (Hybridoma Bank, contra la proteína de Xenopus laevis) y revelado con quimioluminiscencia. Se visualizaron cuatro bandas mayoritarias de 33, 51, 104 y 133 kDa (correspondientes a las formas madura y precursores de la integrina b1) en las fracciones de membrana plasmática y microsomas. Nuestros datos sugieren que la integrina b1 se expresa en ovocitos de B. arenarum y que estaría involucrada en la interacción ovocito-espermatozoide a nivel de membrana plasmática