Optimización de la expresión heteróloga de una proteína con propiedades antifúngicas

ARMANDO, M; MAGNI, C; BLANCATO, VS

Rosario

Congreso; XIII Congreso y XXXI Reunión Anual de la SBR; 2011

Sociedad de Biología de Rosario

La salud humana es afectada por los hongos no sólo por la producción de metabolitos secundarios (micotoxinas) sino también a través de infecciones causadas por dichos microorganismos. Candida albicans es una levadura potencialmente patógena que causa infecciones sistémicas. Estos hongos unicelulares son considerados oportunistas debido a su habilidad para producir enfermedades graves en individuos con el sistema de defensa alterado. A pesar de la disponibilidad de fármacos para el tratamiento de las infecciones fúngicas, se presentan problemas a causa de la aparición de resistencia, espectros de acción limitados, costos elevados y producción de efectos adversos. Por estas razones se deben buscar nuevos antimicóticos que superen dichas limitaciones. Muchos péptidos están siendo evaluados para su uso como agentes farmacéuticos en el tratamiento de enfermedades fúngicas humanas y animales. Las proteínas antifúngicas son antimicrobianos de origen peptídico que afectan, de algún modo, el crecimiento fúngico. En nuestro laboratorio se clonó y expresó en Escherichia coli una proteína (ScTox) de Streptomyces coelicolor que mostró actividad inhibitoria del crecimiento de levaduras de importancia médica como C. albicans, C. glabrata y C. krusei. El objetivo del presente trabajo fue optimizar los niveles de expresión de ScTox, para ello se analizó la expresión de dicha proteína en diferentes condiciones en las cepas de E. coli BL21 codón plus, Rosetta y Origami, asimismo se evaluó la influencia de la fusión a una extensión de histidinas (His6) N- o C-terminal, o a la proteína de unión a maltosa (MBP). La proteína de fusión ScTox-His6 se expresó mayoritariamente en forma insoluble en todas las condiciones ensayadas, la mayor cantidad de proteína soluble fue obtenida con la combinación de la cepa Origami con la extensión de histidinas en posición C-terminal. En cambio la fusión ScTox-MBP se expresó en cantidades equiparables en forma soluble e insoluble; mostrando un nivel de expresión muy superior al obtenido con la fusión a His6. En ambos casos la proteína de fusión ScTox pudo ser purificada por cromatografía de afinidad. Los resultados obtenidos permitirán el estudio de la actividad biológica de ScTox y la obtención de anticuerpos policlonales que permitirán el análisis de la expresión de la proteína sin necesidad de fusionarla a una secuencia aminoacídica particular para su posterior detección.