Localización sub-celular de la Hexosaminidasa de gametas de B. arenarum

MORALES ES Y ARRANZ SE

Rosario, Santa Fe, Argentina

Congreso; XIII Congreso y XXXI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2011

Sociedad de Biología de Rosario.

Las glicosidasas han sido involucradas en la fecundación en numerosas especies de animales; aun filogenéticamente distantes. Ha sido propuesto que durante la fecundación estas enzimas participan, no solo en la unión de las gametas, sino además en el pasaje de la cubierta que recubre a los ovocitos (zona pellucida en mamíferos o envoltura vitelina en anfibios) y en la prevención de la polispermia. En nuestro laboratorio previamente se demostró que la N-acetil-glucosaminidasa (Hex), enzima que remueve residuos N-acetil-glucosaminina o N-acetil-galactosamina terminales de glicoconjugados, interviene en la fecundación del anfibio anuro B. arenarum. Sin embargo aún no se ha determinado cuál es la etapa de la fecundación en la que interviene. Como un pre-requisito para vislumbrar su rol biológico nos propusimos como objetivo determinar su localización sub-celular tanto en ovocitos como en espermatozoides. Mediante ensayos de actividad en geles nativos y experimentos de Western blot pudimos demostrar la existencia de 3 isoformas de la Hex en los ovocitos de B. arenarum, compuestas por polipéptidos de 65, 44 y 37 kDa. Sólo la Hex compuesta por el polipéptido de 65 kDa fue encontrada en producto de gránulos corticales, pudiendo estar potencialmente involucrada en la prevención de la polispermia. Para determinar la localización sub-celular de la Hex en espermatozoides pusimos a punto experimentos de centrifugación diferencial que nos permitieron obtener fracciones sub-celulares espermáticas puras. Mediante ensayos de actividad in-vitro y utilizando sustratos fluorogénicos pudimos determinar que la Hex de espermatozoides de B. arenarum está presente tanto en la matriz acrosomal de los espermatozoides como en su membrana plasmática. Estos hallazgos nos permiten proponer que la Hex presente en las gametas de B. arenarum no sólo podría intervenir en la interacción inicial del espermatozoide con el ovocito, sino que además podría estar involucrada en el pasaje del espermatozoide reaccionado a través de la cubierta vitelina de los ovocitos como así también en la prevención de la polispermia. Actualmente en nuestro laboratorio estamos desarrollando ensayos experimentales que nos permitirán estudiar en forma aislada cada una de estas etapas de la fecundación y determinar el rol de la Hex en cada una de ellas.