Análisis del estado físico del ADN de papillomavirus humano tipo 16 como marcador de progresión maligna

BERCOFF, M.; CHOUHY, DIEGO; RUBÉN MAMPRÍN,; GARDIOL, DANIELA; ADRIANA ANGELICA GIRI

Rosario

Congreso; VIII Congreso y XXVI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario (SBR); 2006

Sociedad de Biología de Rosario

Los Papillomavirus humanos (HPV) de alto riesgo, tales como el HPV-16, son agentes causantes de lesiones que pueden progresar a malignidad y se encuentran asociados con el carcinoma de cuello de útero de carácter invasor. El genoma de HPV-16 es mantenido en forma episomal en lesiones de bajo grado, mientras que en lesiones de alto grado se encuentra principalmente integrado al genoma celular. La integración viral ocurre por la ruptura de la región E1/E2 del genoma de HPV. E2 codifica para una proteína que regula la transcripción viral y su pérdida permite la expresión de los oncogenes virales, E6 y E7, y el inicio de la transformación celular. Por lo tanto, la integración del ADN viral en el genoma celular es considerada un evento clave en la carcinogénesis asociada a HPV. El objetivo de este trabajo es el análisis del estado físico del ADN de HPV-16 como marcador de progresión maligna. Para ello desarrollamos y optimizamos un ensayo basado en la co-amplificación por PCR de E2 y E6 y la detección colorimétrica de ambos amplicones. La medida del cociente E2/E6 a partir de las absorbancias resultantes luego de la detección colorimétrica de cada amplicón permitirá determinar si el ADN viral se encuentra episomal (E2/E6 = 1), integrado (E2/E6 = 0) o en ormas mixtas (0 << E2/E6 << 1). Se optimizó esta PCR multiplex con el plásmido pW12 que contiene el genoma completo de HPV-16. Se obtuvieron condiciones de PCR en la cuales los valores de absorbancia para E2 y E6 fueron similares en presencia de ADN de HPV-16  pisomal (E2/E6 = 1). La sensibilidad analítica del ensayo para cada fragmento génico fue de 100 copias/reacción. En una segunda etapa se evaluará el valor pronóstico del cociente E2/E6 en la progresión maligna en muestras de pacientes infectadas con HPV-16 y que presentan lesiones cervicales de distinto grado de severidad. Este ensayo permitirá correlacionar el grado de severidad de las lesiones con el nivel de integración viral y su contribución en los procesos de progresión maligna asociados a HPV.