ANÁLISIS DE LA REGULACIÓN DE PROTEÍNAS DE ADHESIÓN CELULAR DURANTE LOS PROCESOS DE CARCINOGÉNESIS

BUGNON VALDANO M; FACCIUTO FLORENCIA; ANA L. CAVATORTA; DANIELA GARDIOL

rosario

Encuentro; XII Congreso XXX Reunion Anual de la Sociedad de Biologia de Rosario; 2010

sociedad de Rosario de Rosario

Los eventos claves del desarrollo del cáncer cervical dependen de la acción de las oncoproteínas E6 y E7 de Papilomavirus humanos (HPV). Las proteínas E6 de HPV estimulan la degradación del oncosupresor Disc Large (hDLG). hDLG es una proteína que participa en la formación de las uniones intercelulares, en el control de la polaridad y proliferación celular,  y en el mantenimiento de la arquitectura de los tejidos. Ya ha sido demostrado que la expresión de  hDLG está disminuida en carcinomas cervicales asociados a HPV, como así también en otros tumores. Estas evidencias han sugerido un rol importante para hDLG en los mecanismos de supresión oncogénica. Hemos  demostrado previamente que los factores  transcripcionales de la familia Snail  se unen  a  la  región promotora  de  hDLG  y  reprimen su actividad transcripcional.  Otras investigaciones posteriores también reportaron una disminución o pérdida de este factor transcripcional  en  diversos tipos de tumores,  especialmente en los estadíos más avanzados de progresión maligna. Ante esto,  nos propusimos estudiar  qué  otros factores transcripcionales podrían estar actuando sobre la región promotora de hDLG, pudiendo ser la regulación transcripcional de dicho gen un evento importante para el proceso carcinogénico  (tanto para tumores asociados como independientes de infecciones de HPV). Así, el análisis bioinformático de la región promotora de hDLG arroja sitios consenso de unión para otros factores, entre ellos la proteína de especificidad 1 (Sp1, stimulating protein).  Sp1 es un factor de transcripción sumamente versátil,  que  ha  sido relacionado  con procesos de crecimiento celular, diferenciación, apoptosis  y angiogénesis. Para estudiar cual podría ser el rol de este factor en el proceso de regulación de hDLG durante la progresión maligna, hemos construido un vector de expresión de Sp1 apto para células eucariotas. En primer lugar, mediante ensayos de transfección y análisis por inmunofluorescencia, hemos demostrado la expresión correcta a partir de dicho vector y la localización predominantemente nuclear de Sp1. Además, mediante ensayos de luciferasa y experimentos de co-transfección hemos evaluado su función sobre la actividad del promotor de  hDLG,  demostrando un efecto activador  sobre dicha región promotora. El efecto de Sp1 sobre los niveles endógenos de hDLG están siendo evaluados. Estos  análisis sobre la  regulación transcripcional del gen  hDLG contribuirán al entendimiento de las variaciones de sus niveles en tumores.