Evaluación de la megacariocitopoyesis en el DPF/PLA. Rol de la GPIa.

GLEMBOTSKY AC.; GOETTE NP.; MARIN OYARZUN CP.; RASLOVA H.; HELLER PG.; MARTA RF.; MOLINAS FC.

Congreso; XII Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis.; 2016

Grupo CAHT

El desorden plaquetario familiar con predisposición a leucemia(DPF/LMA), es una trombocitopenia hereditariacausada por mutación de RUNX1, factor de transcripción que regula múltiples genesmegacariocíticos. En microarraysde expresión de megacariocitos donde se inhibió RUNX1, identificamos disminución de GPIa (receptor de colágeno). Previamente hallamos disminución de la expresión plaquetaria de GPIay dela respuesta al colágeno en pacientes con DPF/LMA. Para esclarecer la fisiopatogenia de la trombocitopenia y evaluar la expresión y funcionalidad de GPIa en megacariocitos (MKs), se cultivaroncélulas CD34+ de sangre periférica de pacientesDPF/LMA, y controles. Se evaluó el desarrollo de colonias megacariocíticas, la pureza (CD41+) y maduración (CD41+42+) de los MKs obtenidos, la expresión de GPIa, por citometría de flujo; la adhesión al colágeno y la etapa de formación de proplaquetas. En medio semisólido a base de colágeno (Megacult) en presencia de citoquinas (TPO, IL6, IL3, FLT3 y SCF), se halló disminución del número y tamaño de las colonias megacariocíticas en los pacientes (n=3) respecto a controles (n=5), 10,5±1,8 vs. 63,8±12,6, respectivamente, p=0,035, test de Mann-Whitney.En cultivo líquido, el % de MKs totales, fue menor en los pacientes (n=2) que en los controles (n=3) 23.4±0.4%vs53,8±12.0%,también la fracción de MKs maduros (CD41+CD42+) resultó 3.4±3.3% vs 16.4±6.5% y hubo ausencia de formación deproplaquetas, confirmando resultados previos.La expresión de GPIa en los MKs de pacientes(n=2) fue menor que en los controles (n=3), 28.6±16.6%vs 89.7±3.5%. Para evaluar el correlato funcional de esta disminución, se midióla adhesión a matrices de colágeno tipo I monoméricoy fibrilar de los MKs incubados durante 16 hrs y posterior tinción con faloidina TRITC yCD61-FITC, utilizando microscopio de inmunofluorescencia. Hubo menor adhesión tanto sobre conformación fibrilar,13±2.9, como monomérica, 19.9±0.9 % de MK adheridos de pacientes respecto al control establecido como 100%,sugiriendo que la reducción en GPIa altera el comportamiento de megacariocitos sobre este sustrato. La alteración de la interacción MK-colágeno, crítica para prevenir la formación prematura de proplaquetas y plaquetas en el nicho osteoblástico de la médula ósea, puede contribuir a la alteración de la producción plaquetaria del DPF/LMA, que como observamos, involucradistintos estadíos de la producción plaquetaria.La GPIadisminuida en megacariocitos y plaquetas sumada al hallazgo de sitios de unión para RUNX1 en el promotor GPIa (ITGA2) mediante análisis in silico sugiere que éste podría ser un blanco de RUNX1 en el megacariocito, evaluado medianteestudios en curso.