Alteración en la funcionalidad de los megacariocitos mediada or los auto-anticuerpos plasmáticos presentes en la Trombocitopenia Inmune Primaria

GRODZIELSKI MATÍAS; DI BUDUO CRISTIAN; GOETTE NP; GURINI E; PIERDOMINICI M; MOLINAS FC; HELLER PG; BALDUINI A; MARTA RF

Congreso; XXII Congreso Argentino de Hematología; 2015

La trombocitopenia immune primaria (PTI) constituye un desorden inmunológico caracterizado por disminución del recuento de plaquetas en sangre periférica debido a una reacción autoinmune contra ciertos antígenos del linaje megacariocítico. Los principales blancos de los auto-anticuerpos, detectados en la mayoría de los pacientes, son las integrinas alphaIIbetaβ3 (receptor de fibrinógeno), alphaIIbeta1 (receptor de colágeno) y el complejo glicoproteico Ib-IX (receptor del factor de von Willebrand). En un estudio previo demostramos que el plasma de pacientes con PTI que presentan anticuerpos dirigidos contra la integrina alphaIIbbeta3, inhibe la formación de proplaquetas in vitro. Por otra parte, los plasmas de PTI conteniendo anticuerpos contra la integrina alphaIIbeta1 interfirieron con la normal inhibición de la formación de proplaquetas producida por el colágeno tipo I. Para determinar el mecanismo por el cual ocurren estas anormalidades, en el presente trabajo realizamos estudios funcionales consistentes en la evaluación de la adhesión y el spreading de megacariocitos normales a matrices de fibrinógeno y colágeno tipo I, en presencia de plasmas conteniendo anticuerpos dirigidos contra las integrinas alphaIIbbeta3 y alphaIIbeta1, respectivamente.Para ello se obtuvieron megacariocitos maduros normales por cultivo durante 13 días de progenitores hematopoyéticos CD34+ provenientes de sangre de cordón umbilical. Dichas células se incubaron durante 16 horas con plasmas recalcificados de pacientes con PTI o controles (10% v/v) sobre cubreobjetos tapizados con fibrinógeno o colágeno I, dependiendo del auto-anticuerpo presente en el plasma patológico a evaluar. Pasado el tiempo de incubación, se contó el número de megacariocitos presentes en el sobrenadante (células no adheridas) y se calculó la cantidad de células adheridas mediante sustracción a las células totales sembradas. Por otra parte, las células adheridas se fijaron y marcaron con anti-CD61-FITC para determinar el porcentaje de células en spreading utilizando un microscopio de epi-fluorescencia. Los experimentos se duplicaron en cultivos independientes.Las muestras de plasmas de PTI conteniendo anticuerpos dirigidos contra el complejo αIIbβ3 (n=6) indujeron una reducción en el porcentaje de megacariocitos adheridos a una matriz de fibrinógeno (test t, p= 0,008), así como en la cantidad de células en spreading (test t, p=0,0027). Por otra parte, los plasmas conteniendo anticuerpos contra la integrina αIIβ1 (n=2) indujeron una reducción en el porcentaje de megacariocitos adheridos a una matriz de colágeno tipo I, así como en la cantidad de células en spreading. Aunque los valores obtenidos en presencia del plasma de ambos pacientes estuvo por debajo del rango de normalidad (media±DS de los controles), los mismos no fueron estadísticamente significativos (test de Wilcoxon) dado el bajo número de muestras analizadas (tabla 1).Estos resultados sugieren fuertemente que la unión de los auto-anticuerpos a sus respectivos receptores en la membrana del megacariocito, interfiere con la correcta unión/señalización de los ligandos naturales, ocasionando una alteración en la funcionalidad de estas células. Esta anormalidad podría ser uno de los factores que contribuyen a la trombocitopenia en esta patología tan compleja.Tabla 1MatrizMuestraNAdhesión (%)P Spreading (%)P FibrinógenoControles677.4±3.40.00840.6±10.20.003Pacientes (anti αIIbβ3)643.4±19.219.3±12.3Colágeno IControles491.7±1.80.13327.1±2.00.2Pacientes (anti αIIβ1)283.8±4.413.4±0.4