CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Las nucleósido difosfato quinasas (NDPK) son enzimas que intervienen en la homeostasis intracelular de nucleótidos di- ytrifosfato. Son consideradas enzimas multifuncionales por participar en diversos procesos celulares como apoptosis,transducción de señales y reparación de ADN, entre otros. De la misma manera, la NDPK1 de Trypanosoma cruzi (TcNDPK1),es una enzima con múltiples funciones ya que es secretada por el parásito, está involucrada en la resistencia a drogastripanocidas y tiene la capacidad de unirse y degradar ácidos nucleicos in vitro. En el presente trabajo estudiamos larelación de la TcNDPK1 con la reparación del ADN in vivo. En primera instancia, evaluamos la frecuencia de mutaciónespontánea en bacterias que expresan la TcNDPK1 mediante la selección de colonias resistentes a rifampicina. Observamosque la frecuencia se redujo 5 veces respecto del control, sugiriendo una posible participación de la TcNDPK1 enmecanismos de reparación de ADN. Para evaluar este fenómeno en T. cruzi, construimos un modelo de sobre-expresión enepimastigotes (N1). Estos parásitos presentan un crecimiento más lento que los parásitos control, alcanzando densidadesde 2 a 3 veces menores en fase estacionaria. El tratamiento con agentes genotóxicos como el peróxido de hidrógenodemostró que sobreviven a altas concentraciones del mismo, siendo la IC50 significativamente superior respecto delcontrol, 323 µM y 182 µM, respectivamente. Por último, se evaluó la integridad del material genético mediante técnicaselectroforéticas clásicas y se encontró que estos parásitos presentan el ADN más degradado. Los resultados mostradossugieren que la TcNDPK1 podría estar involucrada en la maquinaria de reparación de ADN, de esta manera su sobreexpresióngeneraría rupturas en el material genético provocando una activación de los mecanismos de reparación y dandocomo consecuencia mayor resistencia al peróxido de hidrógeno.