Participación del coactivador RAC3 y de la Ciclina D1en la progresión tumoral

RUBIO MF; ALVARADO CV; COLO GP; COSTAS MA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Invetigacion Clinicas; 2007

SAIC

ha visto que el coactivador RAC3 estaría involucrado en la progresión del ciclo celular. Mientras que en trabajos previos hemos demostrado que, vía un complejo conteniendo al ER y NFkB, modula la expresión de Ciclina D1 en células de tumor mamario y además observamos que CD1 no solo interacciona con el factor de transcripción NF-κB sino que es capaz de modular negativamente su actividad de manera dosis dependiente. En este trabajo quisimos determinar si este efecto era contrarrestado, ya sea por la sobrexpresión de RAC3 (20 ng) o por la inhibición de deacetilasas (30 nM TSA), para ello se realizaron ensayos reporteros donde pudimos observar que el efecto de inhibición mediada por CD1 (a 100 ng 60% de inhibición) se ve revertida (TSA 64185± 3940 vs 106362 ± 10822 y RAC3 28059 ± 4296 vs 59070 ± 8021) en ambos casos. Esto podría implicar que existiría una modulación temporal de reclutamiento de complejos a nivel del promotor y para corroborar esto se realizaron ensayos de inmunoprecipación de cromatina de las secuencias κB del promotor de CD1 observándose que dicho reclutamiento existe y que NF-κB y CD1 son reclutadas al promotor en forma sincrónica. Para determinar como sería la respuesta proliferativa cuando RAC3 y/ o CD1 son sobrexpresados realizamos ensayos de proliferación en la línea no tumoral HEK 293 transefectada con plásmidos expresando una o ambas proteínas y observamos que la presencia de ambos tendrían un efecto antagónico sobre la proliferación celular a 24 hs (CD1 0,294 ± 0,073, RAC3 0,608 ± 0,098 vs CD1 + RAC3 0,066 ± 0,014). Dado que el coactivador RAC3 se encuentra sobrexpresado en distintos tipos de tumores y día a día su importancia en el desarrollo de los mismos aumenta, encontrar de que manera esta interaccionando con otras proteínas que están involucradas en la progresión tumoral ayuda al entendimiento y al diseño de nuevas estrategias para su tratamiento.κB sino que es capaz de modular negativamente su actividad de manera dosis dependiente. En este trabajo quisimos determinar si este efecto era contrarrestado, ya sea por la sobrexpresión de RAC3 (20 ng) o por la inhibición de deacetilasas (30 nM TSA), para ello se realizaron ensayos reporteros donde pudimos observar que el efecto de inhibición mediada por CD1 (a 100 ng 60% de inhibición) se ve revertida (TSA 64185± 3940 vs 106362 ± 10822 y RAC3 28059 ± 4296 vs 59070 ± 8021) en ambos casos. Esto podría implicar que existiría una modulación temporal de reclutamiento de complejos a nivel del promotor y para corroborar esto se realizaron ensayos de inmunoprecipación de cromatina de las secuencias κB del promotor de CD1 observándose que dicho reclutamiento existe y que NF-κB y CD1 son reclutadas al promotor en forma sincrónica. Para determinar como sería la respuesta proliferativa cuando RAC3 y/ o CD1 son sobrexpresados realizamos ensayos de proliferación en la línea no tumoral HEK 293 transefectada con plásmidos expresando una o ambas proteínas y observamos que la presencia de ambos tendrían un efecto antagónico sobre la proliferación celular a 24 hs (CD1 0,294 ± 0,073, RAC3 0,608 ± 0,098 vs CD1 + RAC3 0,066 ± 0,014). Dado que el coactivador RAC3 se encuentra sobrexpresado en distintos tipos de tumores y día a día su importancia en el desarrollo de los mismos aumenta, encontrar de que manera esta interaccionando con otras proteínas que están involucradas en la progresión tumoral ayuda al entendimiento y al diseño de nuevas estrategias para su tratamiento.κB del promotor de CD1 observándose que dicho reclutamiento existe y que NF-κB y CD1 son reclutadas al promotor en forma sincrónica. Para determinar como sería la respuesta proliferativa cuando RAC3 y/ o CD1 son sobrexpresados realizamos ensayos de proliferación en la línea no tumoral HEK 293 transefectada con plásmidos expresando una o ambas proteínas y observamos que la presencia de ambos tendrían un efecto antagónico sobre la proliferación celular a 24 hs (CD1 0,294 ± 0,073, RAC3 0,608 ± 0,098 vs CD1 + RAC3 0,066 ± 0,014). Dado que el coactivador RAC3 se encuentra sobrexpresado en distintos tipos de tumores y día a día su importancia en el desarrollo de los mismos aumenta, encontrar de que manera esta interaccionando con otras proteínas que están involucradas en la progresión tumoral ayuda al entendimiento y al diseño de nuevas estrategias para su tratamiento.κB y CD1 son reclutadas al promotor en forma sincrónica. Para determinar como sería la respuesta proliferativa cuando RAC3 y/ o CD1 son sobrexpresados realizamos ensayos de proliferación en la línea no tumoral HEK 293 transefectada con plásmidos expresando una o ambas proteínas y observamos que la presencia de ambos tendrían un efecto antagónico sobre la proliferación celular a 24 hs (CD1 0,294 ± 0,073, RAC3 0,608 ± 0,098 vs CD1 + RAC3 0,066 ± 0,014). Dado que el coactivador RAC3 se encuentra sobrexpresado en distintos tipos de tumores y día a día su importancia en el desarrollo de los mismos aumenta, encontrar de que manera esta interaccionando con otras proteínas que están involucradas en la progresión tumoral ayuda al entendimiento y al diseño de nuevas estrategias para su tratamiento.