LA NUCLEÓSIDO DIFOSFATO QUINASA 1 DE TRYPANOSOMA CRUZI FORMA GRANULOS QUE DEPENDEN DE SU ESTRUCTURA CUATERNARIA

PEREIRA CA; GOMEZ BARROSO JA; AGUILAR CF; REIGADA C; DIGIROLAMO F; SAYE M; MIRANDA MR

Congreso; X Congreso de Protozoología y Enfermedades parasitarias; 2014

Las nucleósido difosfato quinasas (NDPK) son enzimas involucradas en la homeostasis intracelular de nucleótidos. En Trypanosoma cruzi, la TcNDPK1 es una enzima multifuncional por poseer, además de la actividad quinasa, la capacidad de unirse y degradar ácidos nucleicos, ser una enzima de secreción y estar involucrada en la resistencia a drogas tripanocidas. Asimismo, TcNDPK1 es hexamérica y localiza en el citoplasma de los parásitos, sin embargo, cuando está fusionada a una proteína dimerizante como la GFP genera gránulos. Este comportamiento es específico de la NDPK y depende de su estructura cuaternaria, sugiriendo que la enzima podría estar oligomerizándose. En el presente trabajo determinamos que los gránulos también se forman en parásitos que expresan la TcNDPK1 no fusionada a GFP bajo condiciones de estrés como ocurre en el proceso de metaciclogénesis. Estudios realizados sobre la estructura cristalina demuestran que la enzima adopta una estructura fibrilar formada por hélices levógiras constituidas por tetrámeros de hexámeros apilados entre sí, nunca antes observada. Interesantemente, mediante la construcción de diferentes mutantes en aminoácidos claves para la formación de la hélice, pudimos establecer que la fibra encontrada en los cristales está asociada a los gránulos observados en los parásitos. Estos resultados sugieren que la TcNDPK1 podría ensamblarse in vivo y que sus múltiples funciones podrían estar reguladas por un mecanismo de polimerización-depolimerización.