Accion del TNF-alfa sobre el promotor de la 3 beta HSDII y la esteroidogénesis en H295R.

SARACO N; PEPE C; BAQUEDANO M; BERENSZTEIN E; COSTAS M A; RIVAROLA M; BELGOROSKY A

Mar del Plata- Buenos Aires

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

El TNF¦Á ha sido detectado en el humano en la corteza adrenal fetal  y en la zona reticularis (ZR) de la adrenal adulta. Se ha descripto que el TNF¦Á en cultivo de c¨¦lulas de adrenal fetal humana, en presencia de ACTH , estimula la s¨ªntesis de DHEA y DHEAS mientras que disminuye la respuesta del cortisol. Dado que la enzima 3¦ÂHSDII no se expresa en la ZR se ha sugerido un rol en el mecanismo de inicio de la adrenarca humana que se caracteriza por el aumento de los niveles s¨¦ricos de DHEA y DHEAS . Hip¨®tesis : TNF¦Á regular¨ªa el promotor de 3¦ÂHSDII. Se estudi¨® el efecto del TNF¦Á sobre el promotor de 3¦ÂHSDII y la esteroidog¨¦nesis en c¨¦lulas H295R en cultivo. La transfecci¨®n de construcciones conteniendo fragmentos del promotor (CI: -698; CII: -297; CIII: -107pb) y la luciferasa como gen reportero mostr¨® que el TNF¦Á(10 ng/ml) disminuye significativamente la actividad del promotor inducida por AMPc(0.5mM): AMPc y AMPc+TNF¦Á (24h): 3,5 y 2,7 ; 2.9 y 1,3 ; 2,1 y 0,9 veces del basal, CI; CII; CIII resp.  En el medio condicionado bajo estimulo con TNF¦Á  y AMPc  se observo a las 24 hs un descenso significativo de la relaci¨®n Cortisol/DHEAS, p<0,05  (Basal: 1,79¡À0,54, AMPc: 4,41¡À0,60, AMPc+TNF¦Á: 1,20¡À0,33). La expresi¨®n del ARNm de 3¦ÂHSDII en H295R (Northernblot) disminuyo bajo AMPc y AMPc+TNF¦Á a las 3 hs, mientras que a las 12 hs el TNF¦Á disminuye la respuesta al AMPc. La preincubaci¨®n con TNF¦Á (20 hs) no modifica la respuesta del promotor (CIII) al AMPc (4hs). La cotransfecci¨®n de la CIII con RelA o con el superrepresor IkB no modifica la respuesta a AMPc. La mutaci¨®n en el promotor CIII de sitios AP1 no  modifica la respuesta a TNF¦Á. Se concluye que el TNF¦Á regula el promotor de 3¦ÂHSDII la cual no seria ni a trav¨¦s de la activaci¨®n de la v¨ªa del NFkB, ni por uni¨®n a sitios AP1. La disminuci¨®n de la expresi¨®n de la 3¦ÂHSDII por acci¨®n del TNF¦Á estar¨ªa implicada en la regulaci¨®n de la s¨ªntesis de andr¨®genos adrenales.