EFECTO ANTIAPOPTOTICO DEL RECEPTOR SOLUBLE DE IL-6 EN CELULAS HEMATOPOYÉTICAS NORMALES Y DE PACIENTES CON TROMBOCITEMIA ESENCIAL

CHAZARRETA CD, MARTA RF, MOLINAS FC.

Mar del Plata

Congreso; LI REUNION SAIC; 2006

EFECTO ANTIAPOPTOTICO DEL RECEPTOR SOLUBLE DE IL-6 EN CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS NORMALES Y DE PACIENTES CON TROMBOCITEMIA ESENCIAL. CHAZARRETA DANIEL, ROSANA MARTA, FELISA MOLINAS Instituto de Investigaciones Medica Alfredo Lanari La interleuquina 6, citoquina estimulante de la megacariocitopoyesis, ejerce su acción a través de su unión al receptor específico en células blanco, IL-6Ra, o formando complejo con la fracción soluble del mismo (IL-6sR) mediado por la gp130. En la trombocitemia esencial (TE), caracterizada por hiperproliferación megacariocítica, se encontró aumento del IL-6sR plasmático. En el presente trabajo se evaluó la acción del IL-6sR sobre la activación de caspasa III en células progenitoras hematopoyéticas CD34+ normales y de pacientes con TE. Además, se evaluó la expresión de IL-6Ra en las CD34+ de ambos grupos. Las células CD34+ de sangre de cordón umbilical de partos normales y de sangre periférica de pacientes con TE sin tratamiento se aislaron por método inmunomagnético. Se evaluó el IL-6Ra por citometría de flujo con anti CD126-PE. Las células se expandieron en medio IMDM con 10% de suero y 25 ng/ml de SCF por 48 hs. Luego de lavarlas se cultivaron 12 hs a 37° y 5% CO2 en IMDM solo (inducción de apoptosis por deprivación de nutrientes), con IL-6 100 ng/ml o IL-6 100ng/ml + IL-6sR 200ng/ml. Al finalizar los cultivos se evaluó el porcentaje de células con caspasa III activada en la población CD34+/CD45+ por citometría de flujo. La expresión de IL-6Ra fue mayor en CD34+ de pacientes 4.0% (0.73-24) n=8, que en normales 0.12% (0-2.5) n=5, p=0.023 Wilcoxon rank sum test. La activación de caspasa III fue mayor en CD34+ normales cultivadas con IL-6, 100% (76.1-142.4), que en las cultivadas con IL- 6/IL-6sR, 82.2% (65.0-103.7) n=7 p=0.038. En el caso de las CD34+ de los pacientes, la activación de caspasa III también fue mayor con IL-6 94.8% (94.37-117.21) que con IL-6/IL-6sR 82.86% (31.3-91.8) n=3 aunque la diferencia no alcanzó significación estadística, p=0.081. En conclusión, tanto en CD34+ normales como de pacientes con TE, el complejo IL-6/IL-6sR ejerce un efecto antiapoptótico. El aumento en el IL-6sR plasmático en estos pacientes podría manifestar este efecto in vivo DE IL-6 EN CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS NORMALES Y DE PACIENTES CON TROMBOCITEMIA ESENCIAL. CHAZARRETA DANIEL, ROSANA MARTA, FELISA MOLINAS Instituto de Investigaciones Medica Alfredo Lanari La interleuquina 6, citoquina estimulante de la megacariocitopoyesis, ejerce su acción a través de su unión al receptor específico en células blanco, IL-6Ra, o formando complejo con la fracción soluble del mismo (IL-6sR) mediado por la gp130. En la trombocitemia esencial (TE), caracterizada por hiperproliferación megacariocítica, se encontró aumento del IL-6sR plasmático. En el presente trabajo se evaluó la acción del IL-6sR sobre la activación de caspasa III en células progenitoras hematopoyéticas CD34+ normales y de pacientes con TE. Además, se evaluó la expresión de IL-6Ra en las CD34+ de ambos grupos. Las células CD34+ de sangre de cordón umbilical de partos normales y de sangre periférica de pacientes con TE sin tratamiento se aislaron por método inmunomagnético. Se evaluó el IL-6Ra por citometría de flujo con anti CD126-PE. Las células se expandieron en medio IMDM con 10% de suero y 25 ng/ml de SCF por 48 hs. Luego de lavarlas se cultivaron 12 hs a 37° y 5% CO2 en IMDM solo (inducción de apoptosis por deprivación de nutrientes), con IL-6 100 ng/ml o IL-6 100ng/ml + IL-6sR 200ng/ml. Al finalizar los cultivos se evaluó el porcentaje de células con caspasa III activada en la población CD34+/CD45+ por citometría de flujo. La expresión de IL-6Ra fue mayor en CD34+ de pacientes 4.0% (0.73-24) n=8, que en normales 0.12% (0-2.5) n=5, p=0.023 Wilcoxon rank sum test. La activación de caspasa III fue mayor en CD34+ normales cultivadas con IL-6, 100% (76.1-142.4), que en las cultivadas con IL- 6/IL-6sR, 82.2% (65.0-103.7) n=7 p=0.038. En el caso de las CD34+ de los pacientes, la activación de caspasa III también fue mayor con IL-6 94.8% (94.37-117.21) que con IL-6/IL-6sR 82.86% (31.3-91.8) n=3 aunque la diferencia no alcanzó significación estadística, p=0.081. En conclusión, tanto en CD34+ normales como de pacientes con TE, el complejo IL-6/IL-6sR ejerce un efecto antiapoptótico. El aumento en el IL-6sR plasmático en estos pacientes podría manifestar este efecto in vivo en normales 0.12% (0-2.5) n=5, p=0.023 Wilcoxon rank sum test. La activación de caspasa III fue mayor en CD34+ normales cultivadas con IL-6, 100% (76.1-142.4), que en las cultivadas con IL- 6/IL-6sR, 82.2% (65.0-103.7) n=7 p=0.038. En el caso de las CD34+ de los pacientes, la activación de caspasa III también fue mayor con IL-6 94.8% (94.37-117.21) que con IL-6/IL-6sR 82.86% (31.3-91.8) n=3 aunque la diferencia no alcanzó significación estadística, p=0.081. En conclusión, tanto en CD34+ normales como de pacientes con TE, el complejo IL-6/IL-6sR ejerce un efecto antiapoptótico. El aumento en el IL-6sR plasmático en estos pacientes podría manifestar este efecto in vivo