Interacción regulatoria entre NF-kB, Ciclina D1 y el coactivador RAC3

RUBIO MARIA FERNANDA; COLÓ GERGINA P; ALVARADO CECILIA V; ESCARIS CECILIA; COSTAS MÓNICA A

Mar del Plata-Buenos Aires

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2006

El gen de ciclina D1 (CD1) es requerido para la progresión tumoral y esta sobreexpresado en cancer de mama. Hemos demostrado previamente que el receptor de estrógenos requiere de la actividad NF-kB para inducir la expresión de la ciclina: el coactivador RAC3, marcador tumoral de este tipo de tumores, es capaz de reclutar en un mismo complejo a ER y NF-kB en el promotor de CD1. La CD1 es capaz de reclutar complejos coactivadores o correpresores. Dado que NF-kB interacciona con RAC3, se quiso determinar si existen complejos conteniendo a CD1 y NF-kB y si afectaban su actividad transcripcional. En células HEK293 (bajo RAC3), T47-D (tumor mama y alto RAC3) se determinó la posible interacción física entre CD1, NF-kB y RAC3 a través de ensayos de co-inmunoprecipitación y Western blot. Además se evaluó el efecto de la sobreexpresión por transfección de CD1 sobre la actividad NF-por ensayos reporteros midiendo Luciferasa, así como ensayos de cambio en la mobilidad electroforética (EMSA) para determinar niveles de factor disponible nuclear. La actividad NF-kB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-kB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-kB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-kB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-kB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-kB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-kB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.