Secuenciación yensamblado del locus ribosomal de T. cruzi y su uso para el diseño de marcadores moleculares

CAMARA MARIA DE LOS MILAGROS, LEON A BOUVIER,2 MELISA MARTINEZ SAYE,2 MARIANA R MIRANDA,1 CLAUDIO A PEREIRA1

buenos aires

Jornada; XI JORNADAS CIENTÍFICAS DEL INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MÉDICAS ALFREDO LANARI - UBA; 2012

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MÉDICAS ALFREDO LANARI

La enfermedad de Chagas causada por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi, presenta una gran incidencia en América Latina. El diagnostico temprano de la enfermedad es clave para lograr un mejor tratamiento. En la actualidad existen diversos métodos de diagnostico, los cuales en muchos casos no son efectivos, ya que pueden ser confundidas con infecciones con otros parásitos como ser Trypanosoma rangeli o los parasitos causantes de las leishmaniasis. Por consiguiente existe una gran demanda de nuevos métodos de diagnostico que no presenten ambigüedades. Un target clave para el diagnostico es la búsqueda de polimorfismos dentro del locus ribosomal. Trypanosoma cruzi y Trypanosoma brucei (agente causal de la enfermedad del sueño) presentan los genes ribosomales organizados en tándem en múltiples grupos ubicados en distintos cromosomas como en el resto de los organismos. El ARNr ribosomal es sintetizado por la RNA polimerasa I como un precursor 35S que luego es procesado. El ARNr 5S es transcripto fuera del nucleolo por la RNA polimerasa III. En tripanosomátidos el 28S presenta una estructura atípica, en T. brucei se ha determinado que se encuentra dividido en seis fragmentos. El resto delos ARNr presentan una disposición similar al resto de los eucariotas. En T. cruzi no se conoce la estructura del locus ribosomal ya que aún no fue correctamente ensamblado debido al alto contenido de secuencias repetitivas que reveló la secuenciación de los genomas.. En el presente trabajo, secuenciamos completamente el locus ribosomal de la cepa Y y de la cepa CL Brener. Encontramos que el locus ribosomal presenta alrededor de 16 kb, presentando una estructura de tipo promotor ribosomal, 18S, 5,8S y 7 28S, 28Sα, 28Sβ, 28Sβ2, 28Sδ, 28Sε,28Sζ y 28Sθ en vez de seis como gnos T. brucei . Pudimos encontrar grandes diferencias entre ambas cepas, en particular en las regiones espaciadoras que podrían ser capitalizadas como herramientas de genotipificación. Por otra parte nos concetraremos en la secuenciación de los locus ribosomales de Trypanosoma rangeli y Leishmania braisiliensis con el fin de encontrar regiones para el diseño de marcadores moleculares que permitan diferenciarlas de Trypanosoma cruzi