Dysmegakaryopoiesis in FPD/AML is linked to myosin deregulation.

BLUTEAU D; GLEMBOTSKY ANA C; RAIMBAULT A; BALAYN N; GILLES L; HELLER PAULA G; NURDEN P; DEBILI N; VAINCHENKER W; FAVIER R; RASLOVA H

Paris

Congreso; Congreso Anual de la Sociedad Francesa de Hematología; 2012

La FPD/AML est une thrombopénie familiale caractérisée par des défauts de fonctions plaquettaires, une prédisposition à la leucémie aiguë myéloblastique et des mutations germinales hétérozygotes du gène RUNX1. C?est une thrombocytopénie de transmission autosomique dominante permettant d´étudier, in vivo et in vitro, l?implication de RUNX1 dans la mégacaryopoïèse humaine. Afin de préciser l?impact de RUNX1, nous avons étudié la mégacaryopoïèse in vitro dérivée des progéniteurs hématopoïétiques CD34+ de plusieurs patients FPD/AML ainsi que l?effet de la répression de RUNX1 par ARN interférence dans les progéniteurs hématopoïétiques normaux. Par ces deux approches, nous avons mis en évidence une diminution de 60-80% de la production de mégacaryocytes matures. De plus, nous avons détecté un défaut de ploïdisation ainsi qu?un défaut de la formation des proplaquettes suggérant que RUNX1 contrôle la mégacaryopoïèse à différents stades de maturation. Récemment, nous avons démontré que l?expression de la myosine non-musculaire IIB (MYH10) est directement réprimée par RUNX1 et que l?expression de cette myosine est nécessaire pour le passage de la mitose à l´endomitose liant ainsi régulation de la polyploïdisation et celle de la différenciation mégacaryocytaire terminale. RUNX1 joue un rôle fondamental dans la régulation des myosines puisque la chaîne légère de myosine MYL9 a été trouvée profondément diminuée dans les plaquettes de patients FPD/AML. Nous avons donc émis l?hypothèse qu?une dérégulation de l?expression des gènes de myosine pourrait expliquer en partie la dysmégacaryopoïèse des patients FPD/AML. La caractérisation de l´expression de ces gènes dans les mégacaryocytes (MK) matures de patients FPD/AML confirme une diminution profonde de MYL9, une baisse de MYH9 et une augmentation de MYH10. Pour démontrer que RUNX1 était directement impliquée dans cette dérégulation, nous avons réprimé RUNX1 dans des mégacaryocytes et montré que l?expression de MYL9 et MYH9 est diminuée alors qu?au contraire celle de MYH10 augmente. Des expériences d?immunoprécipitation de la chromatine dans les mégacaryocytes et des tests de transactivation transitoire dans la lignée mégacaryocytaire HEL ont permis de montrer que MYL9, et MYH9 sont également directement régulées par RUNX1. Les données de la littérature montrent que MYL9 et MYH9 sont impliquées dans la plaquettogénèse et donc leur dérégulation chez les patients FPD/AML contribue sans doute à la thrombopénie. Pour montrer que la persistance de MYH10 dans les MK de patients FPD/AML entraine un défaut de ploïdisation, nous avons traité les MK de patients par un inhibiteur chimique des myosines non-musculaires, la blebbistatine. Nous montrons que l?inhibition de la MYH10 par la dose de 25m de blebbistatine corrige le défaut de ploïdisation chez ces patients. L´utilisation en parallèle des approches cellulaires et moléculaires démontre que RUNX1 contrôle la différenciation mégacaryocytaire, la ploïdie et la formation des proplaquettes en association avec la régulation de l´expression des myosines. En conséquence, l?ensemble la dérégulation globale de l´expression des myosines contribue à la thrombocytopénie des patients FPD/AML.