Formación de plaquetas y apoptosis en trombocitopenias autoinmunes

LEV PAOLA R; CONTRUFO GERALDINE; GOETTE NORA P; GLEMBOTSKY ANA C; ESPASANDIN YESICA R; GARCÍA A; FERRARI LUCIANA; HELLER PAULA G; MOLINAS FELISA C; MARTA ROSANA F

Montevideo

Congreso; XXII Congreso Internacional del Grupo Cooperativo Latinoamericano de Hemostasia y Trombosis (CLAHT); 2011

Grupo Cooperativo Latinoamericano de Hemostasia y Trombosis (CLAHT)

La etiología de la trombocitopenia autoinmune (TA) es principalmente la destrucción periférica de plaquetas y la inhibición de la megacariopoyesis, ambas debidas a autoanticuerpos (autoAc). En este trabajo se evaluó la formación de proplaquetas (PP) y la apoptosis de plaquetas en pacientes con TA, ya que son aspectos aún no esclarecidos en esta patología. Metodología: se estudiaron 8 pacientes (P) y 8 normales (N). Progenitores CD34+ obtenidos de sangre periférica se cultivaron durante 13 días hasta obtener megacariocitos maduros (MK). En estas muestras se evaluó la formación de PP en los días subsiguientes por recuento en microscopio invertido. La apoptosis de plaquetas se determinó mediante expresión de fosfatidilserina (PS) por unión a anexina V y evaluando la variación del potencial de membrana mitocondrial (DeltaPm) (JC-1, citometría de flujo). El tamaño plaquetario se evaluó mediante el volumen plaquetario medio (VPM) (contador hematológico) y el diámetro plaquetario medio (DPM) (programa informático de análisis celular). La especificidad de los autoAc se determinó por ELISA en el plasma y el eluído plaquetario. Resultados y discusión: Las plaquetas de los pacientes tuvieron mayor DeltaPm (relación P/N=1.89) (Suma rangos señalados Wilcoxon, p=0.03) y normal expresión de PS, evidenciando activación de eventos tempranos de apoptosis. Todos los pacientes tuvieron aumento de plaquetas reticuladas (plaq. jóvenes) en circulación: rango 11.8-24.8% (VN=2.5-9.3 (naranja de tiazol-citometría de flujo). El VPM estuvo aumentado en todos los P, rango 10,2-11 (VN=8.9+1.1) mientras que el DPM estuvo aumentado en 3/6 P, rango 2.4-4.1 (VN=2.4+0.36). El recuento de PP en cultivo de MK primarios no difirió entre P(1.39%) y N(1.35%) así como tampoco el grado de diferenciación (expresión de GPbeta3) 69% para ambos; y de madurez (expresión de GPIb) P:35.4%, N:40.3% (evaluados por citometría de flujo: CD61 y CD42b). De los 6 P evaluados para autoAc, uno tuvo autoAc contra la GPalfa2bbeta3 en plasma y eluído plaquetario y otro contra la GPIaIIa en plasma. Se estudió además, el efecto del plasma de los P en la formación de PP de MK provenientes de progenitores CD34+ normales obtenidos de sangre de cordón umbilical, observándose un efecto inhibitorio franco en la muestra del P portador de autoAc contra la GPalfa2bbeta3: 0.6% (VN:2.5-5.9%). En conjunto los resultados sugieren aumento de la apoptosis en plaquetas de pacientes con trombocitopenias de origen inmunológico y una actividad inhibitoria de los autoanticuerpos en la trombopoyesis.