El ciclo de vida del Trypanosoma cruzi in vitro: Obtención de tripomastigotes y amastigotes transgénicos.

MARÍA DE LOS MILAGROS CÁMARA, LEÓN A. BOUVIER, MARIANA R. MIRANDA Y CLAUDIO A. PEREIRA.

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

sociedad argentina de protozoologia

La mayoría de los estudios utilizando parásitos modificados genéticamente de T. cruzi se realizan en el estadio de epimastigote debido a la facilidad en su cultivo y en las técnicas de transfección. Sin embargo, en la mayoría de los casos sería de gran utilidad disponer de parásitos transgénicos en los estadios de tripomastigote y amastigote que son los más relevantes a nivel clínico. En el presente trabajo presentamos un método simple de diferenciación de las cepas CL Brener e Y a través de tratamientos en medio LIT a pH acido y posterior infección de cultivos celulares. Los porcentajes de diferenciación para las cepas estudiadas fueron aproximadamente del 40%. Luego de infecciones sucesivas los parásitos fueron nuevamente diferenciados de tripomastigote y amastigote a epimastigote mediante un pasaje a medio LIT y a estos últimos se los transfectó con plásmidos de expresión con genes de proteínas fluorescentes. Una vez obtenidos los parásitos transgénicos se infectaron células con los mismos, obteniendo estadios infectivos que expresaban dichas construcciones. Mediante esta técnica simple podemos obtener en le laboratorio los diferentes estadios del ciclo de vida de T. cruzi a partir de una cepa de baja infectividad modificada o no genéticamente.