Caracterización molecular y funcional de un transportador de espermidina (TcPAT12) de Trypanosoma cruzi.

CANEPA, GASPAR; CARRILLO, CAROLINA; ALGRANATI, ISRAEL; MIRANDA, MARIANA; BOUVIER, LEON; PEREIRA, CA

Buenos Aires

Congreso; V Jornadas científicas del instituto de investigaciones medicas Alfredo Lanari; 2006

INTRODUCCIÓN – Trypanosoma cruzi, el agente causante de la enfermedad de Chagas, afecta a millones de personas en Latino América. Con el propósito de detectar blancos potencialmente aptos para el diseño de quimioterapias antiparasitarias, el principal abordaje se basa en investigar las posibles diferencias entre los caminos metabólicos utilizados por el protozoario y por las células de los hospedadores mamíferos. De esta manera, el metabolismo de poliaminas constituye un proceso atractivo para su estudio debido a que Trypanosoma cruzi es el único organismo eucariótico incapaz de sintetizar poliaminas de novo. Las poliaminas son un grupo de moléculas que cumplen múltiples funciones esenciales tanto en la biosíntesis de ácidos nucleicos y proteínas como en la proliferación y diferenciación celular. Esto explica la dependencia de los parásitos del transporte de poliaminas desde el medio externo. Utilizando datos del genoma de T. cruzi  hemos podido identificar un gen, TcPAT12, con un alto porcentaje de identidad con un transportador de poliaminas de Leishmania major.   OBJETIVOS –  Validar y caracterizar molecularmente a TcPAT12 como un transportador de poliaminas mediante su expresión heteróloga en un modelo apropiado para expresar proteínas de membrana de T.cruzi con múltiples dominios transmembrana. También se propone caracterizar la especificidad de sustrato y propiedades bioquímicas del mismo.   MATERIALES y METODOS – Para la expresión heteróloga de TcPAT12 se clono dicho gen en el plásmido pGEM-HE que contiene secuencias especificas para facilitar su expresión en ovocitos de Xenopus laevis.  Los ensayos de transporte utilizando poliaminas marcadas fueron realizados 48 horas post-microinyección. Los ensayos de transporte en oocitos y parásitos se realizaron utilizando sustratos marcados radioactivamente.   RESULTADOS y CONCLUSIONES. En este trabajo describimos por primera vez las propiedades bioquímicas y moleculares de un transportador de T. cruzi con alta afinidad por espermidina. El gen TcPAT12 fue expresado funcionalmente en oocitos de Xenopus laevis mostrando altos niveles de transporte de espermidina. Constantes de afinidad similares fueron obtenidas cuando se compararon epimastigotes de T. cruzi con el transportador expresado en oocitos de X. laevis. Además, TcPAT12 también transporta putrescina y el aminoácido arginina con menor afinidad.