Estudio de la proteína transportadora de ceramida en parásitos

LANDONI, M.; DUSCHAK, V.,; A S COUTO

Mar del Plata

Simposio; XX Simposio Nacional de Química Orgánica; 2015

Sociedad Argentina de Investigaciones en Química Orgánica

El conocimiento de la estructura y la función de los esfingolípidos (SL) enprotozoarios patógenos continua siendo escasa. Existen datos que sugieren que los SLjuegan un rol importante en múltiples aspectos de la vida celular incluyendodiferenciación, replicación, tráfico, y síntesis de factores virulentos. En nuestrolaboratorio hace ya algunos años se está trabajando en la determinación estructural deSL de Trypanosoma cruzi y Plasmodium falciparum así como en la identificación ycaracterización de las enzimas involucradas en su metabolismo con el fin de definir lasbases moleculares con que los SL contribuyen en la infección y de determinar blancosque permitan desarrollar inhibidores específicos para evaluarlos como nuevas drogasantiparasitarias. Las enzimas del metabolismo de los esfingolípidos se encuentraníntimamente relacionadas unas con otras generando una red interconectada que regulano solo los niveles de los lípidos bioactivos individuales, sino también susinterconexiones metabólicas. En las células de mamífero, la mayoría de los productoshan sido muy estudiados y las enzimas involucradas han sido bien caracterizadas, sinembargo, en protozoarios parásitos, es un área prácticamente desconocida. En este trabajo se busca determinar la presencia de la enzima responsable deltransporte de la ceramida (CERT) desde el retículo endoplásmico donde es sintetizadahasta el Golgi donde es posteriormente transformada en los diferentes metabolitos. Enmamíferos esta enzima se encuentra bien caracterizada y se conoce que la misma tienemultiples sitios de fosforilación. Fue posible determinar la presencia de proteínas endiferentes parásitos que son reconocidas por un anticuerpo anti-CERT humanaindicando la posible existencia de este tipo de proteínas que pertenecen a una superfamilia conocida por su conservación. Paralelamente se comenzó con la purificación parcial de la proteína basándonosen la característica de la misma de encontrarse fosforilada utilizando una precipitacióncon CaCl en presencia de fosfatos obteniéndose una fracción enriquecida tanto enproteínas fosforiladas que se evidencian por SDS-PAGE seguida de una tinción conquercetina específica para fosfoproteínas como en la proteína reconocida por elanticuerpo. 2Simultáneamente también se determinó el reconocimiento de la proteína por elanticuerpo específico con y sin tratamiento con fosfatasa alcalina. Estos resultados indican la presencia de una probable proteína transportadora deceramida en los Trypanosoma cruzi con características estructurales similares a las demamíferos que no había sido descripta hasta el momento. La caracterización de las proteínas de la fracción parcialmente purificada porespectrometría de masa se encuentra en desarrollo así como los ensayos de actividadin-vivo e in-vitro.