Síntesis de metil alpha-D-[6-3H]galactofuranosido, sustrato para la caracterización de alpha-D-galactofuranosidasas.

BORDONI, A; LIMA, C; MUCHNIK DE LEDERKREMER, R; MARINO, C

Mar del Plata, Argentina

Congreso; SINAQO XVI Simposio Nacional de Quimica Organica; 2007

Sociedad Argentina de Investigaciones en Quimica Organica

Como parte de nuestros estudios referidos a la glicobiología de galactofuranosa desarrollamos una secuencia sintética para la introducción de tritio en el C-6 de unidades de D-Galf.1 Esta secuencia fue utilizada para la síntesis de metil [6-3H]b-D-Galf (1b) y UDP[6-3H]-a-D-Galf (2).2 Utilizando estos sustratos, se realizaron estudios de las enzimas relacionadas con la biosíntesis y el metabolismo de unidades b-D-Galf en cultivos de Penicillium fellutanum, modelo de estudio no patogénico.1,2 Penicillium varians es un hongo también no patógeno y de fácil cultivo, el cual produce el exo polisacárido varianosa que contiene la unidad repetitiva I. La presencia simultánea de unidades a y b señalan a P. varians como un modelo apropiado para el estudio de la glicobiología de a-D-galactofuranósidos. Uno de nuestros objetivos es el estudio del metabolismo de la varianosa mediante el análisis de las glicosidasas presentes en el medio de cultivo. Por analogía con la función nutricional que cumplen otros exo polisacáridos de hongos, la estructura I, supondría la presencia de una b-D-galactofuranosidasa, ya detectada, y de una a-D-glucosidasa y una a-D-galactofuranosidasa, cuya función sería degradar las cadenas laterales de I. Con el propósito de disponer de un sustrato sensible para la búsqueda de a-D-galactofuranosidasas, no descriptas hasta el momento, se sintetizó metil a-D-[6-3H]Galf (1a). Se partió de ácido D-galacturónico (3), que por tratamiento con MeOH en presencia de resina catiónica a temperatura ambiente y tiempos de reacción cortos, conduce únicamente a la mezcla anomérica 4 en relación 7:3, y no se detectan formas piranósicas (Esquema 1). Si bien la selectividad en favor de 4a es baja, la separación por cromatografía en columna de la mezcla a y b es eficiente y los ésteres metílicos 4a y b constituyen precursores muy apropiados para la introducción de una marca de tritio por reducción del grupo carboxilo con NaB3H4. La secuencia sintética se simplifica significativamente en comparación a la previamente descripta para 1b.1 Se realizó la caracterización cromatográfica (TLC y HPAEC) de 1a para facilitar el monitoreo de una posible actividad de a-D-galactofuranosidasa en cultivos de P. varians. Se realizó la caracterización cromatográfica (TLC y HPAEC) de 1a para facilitar el monitoreo de una posible actividad de a-D-galactofuranosidasa en cultivos de P. varians.