IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Presencia de un profago en B. argentinensis: inducción con Mitomicina C y caracterización preliminar (Póster)
Autor/es:
SEBASTIÁN KLINKE; EDGARDO HERNÁNDEZ; JOSÉ LUIS LÓPEZ; GABRIELA SYCZ; SUSANA VÁZQUEZ; MARTIN ARAN; LEONARDO PELLIZA; WALTER MAC CORMACK
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; XVIII Congreso Latinoamericano de Ciencias del Mar COLACMAR 2019; 2019
Institución organizadora:
Asociación Latinoamericana de Investigadores de Ciencias del Mar (ALICMAR)
Resumen:
Los  bacteriófagos  y  en  particular  los  fagos  temperados  (lisogénicos  o  profagos), juegan  un  rol  clave  en  la  evolución  microbiana,  los  ciclos  biogeoquímicos  y  las enfermedades humanas. Proteínas virales expresadas durante el ciclo viral lisogénico conferirían a la célula infectada ventajas ecológicas. La lisogenia en bacterias marinas es  un  fenómeno  frecuente.  Durante  la  prospección  y  caracterización  de  productos génicos  de B. argentinensis, una  flavobacteria  marina  antártica,  se  describió  la estructura  molecular  de  la  proteína  C24.  La  cristalografía  de  C24,  y  la  existencia  de homólogos  virales  en  base  de  datos  de  secuencias  (GenBank)  permitió  hipotetizar sobre  un  eventual  origen  viral  de  dicha  proteína.  Cultivos  puros  de B.  argentinensis fueron tratados con 0,2 microg/ml de Mitomicina C para inducir el ciclo lítico de eventuales fagos lisogénicos. Este experimento de inducción resultó en la lisis bacteriana inferida por  la  disminución  de  la  densidad  óptica  (DO-600nm)  del  cultivo  tratado  respecto  del control. La progenie viral resultante fue purificada utilizando 10% de PEG-8000 y 1M de NaCl en presencia de DNAsa 1. La suspensión viral concentrada fue visualizada por microscopia electrónica de transmisión (TEM). Una alícuota de aquella suspensión fue sometida a tratamiento con proteinasa K (PK) y precipitación con etanol. El análisis de  TEM  mostró  que  la  suspensión  estaba  constituida  casi  exclusivamente  por  un morfotipo de fago con cola. El genoma viral extraído de las partículas contuvo un ADN doble cadena de aproximadamente 30 kpb. Finalmente, el gen de C24 fue amplificado por  reacción  de  la  polimerasa  en  cadena  (PCR)  a  partir  del  extracto  de  ácidos nucleicos provenientes de las partículas virales libres de ADN genómico bacteriano. En  conclusión,  la  hipótesis  de  trabajo  planteada  inicialmente pudo  ser  confirmada experimentalmente,  y  efectivamente  C24  está  codificada  por  un  profago  integrado  en el genoma de B. argentinensis. Los datos estructurales obtenidos por la cristalografía de rayos X de C24 mostraron homología estructural con la proteína larga de las fibras de  la  cola  del  fago  T4,  aportando  una  evidencia  más  que  soporta  el  origen  viral  de C24.  Estos  resultados  preliminares  serán  complementados  por  la  obtención  de  la secuencia  nucleotídica  completa  del  genoma  viral,  la  determinación  del  rango  de hospedadores in vitro para el bacteriófago, la prospección de genes virales de interés biotecnológico y la existencia de mecanismos de defensa contra el fago (CRISPR-Cas) en B. argentinensis.