La Asociación de la Proteína de la Cápside del Virus del Dengue a Lipid Droplets es Necesaria para la Encapsidación Viral

SAMSA MM, MONDOTTE JA, IGLESIAS NG, ASSUNÇÃO-MIRANDA I, BARBOSA-LIMA G, DA POIAN AT, BOZZA PT, GAMARNIK AV

Hotel casa Serrana-Huerta Grande, Córdoba

Simposio; XXIX Reunión Científica Anual de SAV; 2009

Sociedad Argentina de Virología

La infección con el virus del dengue causa en el hombre la enfermedad viral más frecuente trasmitida por mosquitos. Las epidemias de dengue continúan surgiendo alrededor del mundo, indicando una urgente necesidad de vacunas profilácticas y antivirales. Durante los últimos años  se ha podido aprender mucho acerca de los mecanismos por los cuales el virus del dengue replica su genoma viral. Sin embargo, aun se desconoce el mecanismo por el cual la proteína de la cápside recluta el genoma viral durante el proceso de encapsidación. En este trabajo, utilizando microscopia confocal, pudimos observar que en células infectadas con el virus del dengue la proteína de la cápside en su forma madura se localiza en la superficie de organelas derivadas del retículo endoplasmático, denominadas lipid droplets (LDs). El análisis mutacional mediante el uso de un clon infeccioso del virus del dengue nos ha permitido identificar aminoácidos hidrofóbicos específicos, localizados en el centro de la proteína de la cápside, necesarios para su asociación con los LDs. La substitución de los aminoácidos L50 o L54 en la proteína de la cápside dio lugar a una pérdida de localización de la proteína sobre la superficie de los LDs e impidió la formación de partículas virales. Además, pudimos observar que la infección con el virus del dengue produce un aumento en el número de LDs por célula, sugiriendo una relación entre el metabolismo de los LDs y la replicación viral. En relación a esta observación, utilizamos un inhibidor de la enzima ácido graso sintasa (FAS) llamado C75 el cual disminuye el número de LDs. Utilizando una concentración no citotóxica de 20 μM de C75 pudimos observar una completa inhibición a las 24 hpi y una disminución de dos órdenes de magnitud en el título viral a 48 hpi en células infectadas con una MOI de 1.       Con el objetivo de disociar los elementos replicativos de ARN que actúan en cis presentes en la secuencia codificante de la proteína  de la cápside, se diseño un virus reportero, el cual nos permite detectar los procesos de entrada, amplificación de ARN y propagación viral, midiendo la actividad del gen reportero (luciferasa). Utilizando este sistema pudimos observar que los virus mutantes con la proteína de la cápside deslocalizada presentaron una disminución en los niveles de amplificación del ARN geonómico. En base a estos resultados nosotros proponemos que los lipid droplets cumplen múltiples propósitos durante el ciclo de replicación viral. En estadios tempranos de la infección viral los LDs cumplirían la función de secuestrar proteínas de la cápside  para luego ser utilizados como plataforma para la encapsidación del genoma viral.