Mecanismo de ensamblado del complejo de repllicación del ARN polimerasa del virus respiratorio sincicial

MOLINA I; SALEGUEIRO M; ESPERANTE S; ALVAREZ PAGGI D; PRAT GAY G; CAMPOREALE G

Buenos Aires

Workshop; Biología Celular y Molecular del ARN; 2018

Fundación Instituto Leloir

El virus respiratorio sincicial es la principal causa de enfermedad respiratoria edel tracto inferior en infantes. Su complejo de repllicación y transcripción esta´formado por la ARN polimerasa L, la proteína de nucleocápside N, la fosfoproteína P y el anti-terminador M2-1. Para comprender el mecanismo de ensamblado, apuntamos a definirlo en términos químicos, estructurales y celulares. La proteína P posee transiciones orden-desorden intrínseco esenciales para su funcionamiento e interactúa en forma estequimétrica con M2-1, con afinidad de 10 nM. A su vez, el antiterminador M2-1 interactúa de manera cooperativa con el ARN con afinidad similar. P y ARN compiten por el sitio de interacción con M2-1, y en exceso de ARN o P, estos se deslplazan mutuamente, sugiriendo un posible rol en el switch entre replicación y transcripción. El análisis de la nucleoproteína N, cuya expresión recombinante genera anillos decaméricos con ARN fuertemente unido, los cuales interactúan estequiométricamente con P, con contribuciones de los dominios N- y C- terminal de P. Transfectando células modelo de infección, determinamos que la interacción entre P y N da lugar a gránulos en presencia de P y N. M2-1 se encuentra sólo en los pneumovirus de modo que su interacción con P constituye un blanco altamente específico. El análisis del complejo expone 6 posibles blancos antivirales proteína-proteína y 3 proteína-RNA.