IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de la distribución subcelular de la proteína de cápside de Zika durante la infección viral
Autor/es:
BYK, LAURA; DE BORDA, LUANA; ROSSI, ANDRÉS HUGO; GAMARNIK, ANDREA; COSTA NAVARRO, GUADALUPE; PALLARÉS, HORACIO
Lugar:
Valle Hermoso, Córdoba
Reunión:
Congreso; XXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2018
Institución organizadora:
SAV
Resumen:
El virus de Zika (ZIKV) es un patógeno emergente de la familia transmitido por mosquitos del género , que contiene un genoma de ARN simple cadena de polaridad positiva que codifica para tres proteínas estructurales y siete no estructurales. La proteína de cápside es una proteína estructural pequeña y altamente básica que forma homodímeros y se asocia con el genoma viral formando las nucleocápsides. Es la proteína viral menos conservada de la familia a nivel aminoacídico, pero conserva la distribución de cargas y la estructura esenciales para la función que desempeña. Durante la infección de flavivirus relacionados como DENV, WNV y JEV la proteína de cápside adquiere una localización subcelular particular y en ciertos casos es determinante para la morfogénesis de partículas. Sin embargo, hasta el momento no se conoce el comportamiento de la proteína de cápside de ZIKV durante la infección viral.En este trabajo, clonamos a la proteína de cápside de ZIKV y obtuvimos anticuerpos específicos. Los mismos fueron empleados para describir su distribución subcelular durante las distintas etapas de la infección. Se llevaron a cabo infecciones con aislamientos epidémicos y no epidémicos del virus de ZIKV tanto en células de mamífero como de mosquito y se realizaron ensayos de inmunofluorescencia utilizando marcadores específicos de organelas celulares. Se determinó que en tiempos tempranos (6-10 hpi) la proteína se localiza principalmente en citoplasma y alrededor de organelas involucradas en el metabolismo de lípidos llamadas (LD). Posteriormente, en etapas medias-tardías de la infección (10-20 hpi) se detecta además en retículo endoplásmico y en el núcleo celular, específicamente en nucléolos. Se realizaron ensayos de fraccionamiento subcelular en células humanas que confirmaron esta distribución. Por otro lado, a partir de clones infecciosos de ZIKV generados en el laboratorio, se diseñaron virus recombinantes que cuentan con una segunda copia de la proteína de cápside fusionada a los fluoróforos mCherry o GFP, con los que se realizaron estudios de microscopía confocal por transfección del ARN viral en células de mamífero. Con estas construcciones fue posible detectar proteína viral desde las dos horas post transfección, principalmente en retículo endoplásmico, citoplasma y nucléolos. Estos estudios en su conjunto describen el comportamiento de la proteína de cápside en las distintas etapas de la infección, contribuyendo al conocimiento de la interacción del virus de ZIKV con el hospedador. Esta información representa una aproximación importante para la búsqueda de determinantes moleculares esenciales para la localización de la proteína y su influencia en el empaquetamiento del genoma, que pueden ser abordados en el desarrollo de nuevas estrategias antivirales.