Estudios estructurales en la enzima RibD de la bacteria patogénica Brucella abortus (Póster)

MARÍA L. CERUTTI; SEBASTIÁN KLINKE; LUCÍA M. POTH; FERNANDO A. GOLDBAUM; HERNÁN R. BONOMI

Bahía Blanca

Congreso; XIII Reunión Anual de la Asociación Argentina de Cristalografía (AACr); 2017

Asociación Argentina de Cristalografía (AACr)

La brucelosis es una enfermedad de los animales originada por bacterias del género Brucella, la cual es endémica en Argentina generando cuantiosas pérdidas económicas principalmente por abortos e infertilidad en el ganado bovino. La brucelosis puede transmitirse al hombre dando lugar en muchos casos a una fase crónica debilitante que afecta diversos órganos reduciendo notoriamente la calidad de vida del paciente. Hasta el momento no existe una vacuna contra la brucelosis humana como así tampoco ningún tratamiento 100% efectivo.Como patógeno intracelular, Brucella depende en forma exclusiva de la riboflavina (vitamina B2) que sintetiza en forma endógena. La ausencia de esta ruta metabólica en mamíferos hace que las enzimas involucradas en la biosíntesis de esta vitamina sean blancos atractivos con potencial terapéutico [1]. La enzima bifuncional Fosforibosilamino Pirimidina Deaminasa/ Fosforibosilamino Pirimidina Reductasa (RibD) de Brucella abortus cataliza dos reacciones consecutivas en la biosíntesis de riboflavina. La primera reacción es una deaminación catalizada por el dominio Citidina y Desoxicitidilato Deaminasa (CDD) y la segunda reacción es una reducción catalizada por el dominio RibD_C.En este trabajo se presentarán los resultados obtenidos hasta el momento que tienen como fin último la determinación de la estructura tridimensional tanto de la enzima completa como la de sus dominios constituyentes, en ausencia y presencia de ligandos. En una primera instancia se efectuó el clonado de la proteína completa (39 kDa) y el de los dominios CDD y RibD_C por separado (15,7 y 24,2 kDa, respectivamente) y se hicieron tests de expresión de las proteínas correspondientes. El dominio RibD_C fue purificado con uso de FPLC y cristalizado por medio de un robot de cristalización Honeybee963. Las condiciones evaluadas en el robot que presentaron crecimiento cristalino fueron optimizadas. En este momento estamos comenzando con los tests de difracción. En líneas generales, el proyecto busca generar la mayor cantidad posible de información estructural de la enzimas participantes en la ruta de la riboflavina en Brucella abortus para el diseño de inhibidores con potencial terapéutico [2].Referencias: [1] A. Bacher et al, (1996). Biochemical Society transactions 24, 89-94. [2] M. Serer et al., (2014). Acta Cryst D70, 1419-1434.