IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización molecular del gen ac12 del baculovirus de la poliedrosis nuclear múltiple de Autographa Californica
Autor/es:
AMALFI, S; LLAUGER, G; TABOGA, O; ALFONSO, V; COSTA NAVARRO, GS; LOPEZ, MG
Reunión:
Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017
Resumen:
Los baculovirus son virus patógenos de insectos, con aplicaciones biotecnológicas. Poseen genoma ADN doble cadena circular empaquetado en un virión envuelto con forma de bastón. Se caracterizan por desarrollar un ciclo de replicación bifásico con dos fenotipos diferenciados: virus brotados y virus derivados de cuerpos de oclusión, estos últimos presentes en las estructuras de resistencia viral, los poliedros. El genoma de Autographa californica múltiple nucleopoliedrovirus (AcMNPV) es de 133 kpb y contiene aproximadamente 150 ORF predichos de los cuales existe un gran número con función aún desconocida. El ORF12 de AcMNPV es un gen cuya secuencia codificaría para una proteína de existencia aún no demostrada, que contiene un dominio F-box predicho. Dada la importancia del estudio de la función de las proteínas virales para conocer su participación en el ciclo de replicación, el objetivo de esta investigación fue determinar el papel del ORF12 en la infección de AcMNPV tanto en cultivo celular como en larvas de insecto. Para ello se generó un virus por deleción del gen ac12 mediante recombinación entre un producto de PCR con un cassette de resistencia a cloranfenicol flanqueado por secuencias del gen y el bácmido bMON14272 (Life Technologies) que contiene el genoma completo de AcMNPV. El ADN del bácmido recombinante fue transfectado en células de insecto, se evaluó su capacidad de diseminar la infección y no se detectaron diferencias comparado con un virus control. Además, a fin de evaluar las cinéticas de multiplicación para ambos virus, se realizaron curvas de crecimiento de un paso que tampoco mostraron diferencias. También se estudiaron las células infectadas por microscopía electrónica de transmisión y los poliedros producidos por el virus mutante, mediante microscopía electrónica de barrido. Así, se determinó que los poliedros tenían un diámetro levemente menor que los salvajes (p