Estabilidad y transiciones conformacionales en un modelo de nucleocápside viral

SALGUEIRO M; PRAT GAY G; ALVAREZ PAGGI D; ESPERANTE S

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Workshop; Biología Celular y Molecular del ARN; 2018

Fundación Instituto Leloir

Dentro de los mononegavirales se encuentran diversos patógenos humanos. Poseen en común nucleocápsides de forma regular helicoidal formadas a partir de la nucleoproteína N la cual protege el ARN genómico. Dentro de estos patógenos se encuentra el virus respiratorio sincicial, responsable en gran medida de la enfermedad de tracto respiratorio inferior en infantes. La expresión de N recombinante genera anillos de 10 m de diámetro y 10 protómeros unidos a ARN de ca. 70 nt. Se conoce que solo el ARN unido a N, y no el ARN libre, actúa como templado de la polimerasa. Diversos análisis por microscopía electrónica, fuerza atómica y estudios biofisicos de los anillos en función del pH, la temperatura, y la composición del solvente indican que los anillos son extremadamente estables y el ARN es resistente a ARNasa. La exposición a desnaturalizantes da lugar a una especie decamérica con aumento de la exposición del ARN y de la interfaz proteica al solvente, no obstante sin liberación de ARN, la cual ocurre solo en presencia de cloruro de guanidinio, donde la N libre agrega irreversiblemente. Nuestros resultados sugieren transiciones conformacionales y funcionales finamente reguladas, ya que una exposición mínima del ARN llevaría a su degradación, y un ocultamiento completo lo haría inaccesible para la polimerasa. Estos anillos solubles constituyen una unidad mínima ideal para el estudio mecanístico, estructural y funcional de las nucleocápsides, común a virus a ARN aún distantes.